【摘要】：色素上皮細胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor,PEDF)是具有抑制血管增生,神經(jīng)營養(yǎng)保護以及抗炎等多種功能的蛋白。對哺乳動物的研究顯示PEDF直接參與調(diào)控脂質(zhì)代謝,但其在硬骨魚類上的作用并不明確。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNFα)是機體內(nèi)重要的細胞因子,具有調(diào)節(jié)細胞分化、增殖、凋亡等功能,并參與調(diào)節(jié)肝臟的脂肪變性過程。本研究首次克隆了草魚PEDF基因,采用原核表達、免疫共沉淀、細胞培養(yǎng)和在體注射等手段,在細胞和個體水平上探討了PEDF的基本特性以及其對TNFα誘導(dǎo)的草魚肝脂變性的緩解作用與機制。獲得的主要研究結(jié)果如下:1.PEDF由409個氨基酸組成,其DNA包含8個外顯子和7個內(nèi)含子。蛋白質(zhì)N端有一個信號肽,C端一個絲氨酸蛋白酶抑制劑結(jié)構(gòu)域。而細胞內(nèi)的PEDF定位于細胞質(zhì),并能與甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)結(jié)合。2.PEDF參與營養(yǎng)代謝的調(diào)控過程。PEDF有著廣泛的組織表達,并在脂肪組織中表達最高。其表達隨著脂肪細胞的分化成熟而增加。在體與離體饑餓試驗顯示PEDF的表達均受到影響。油酸與胰島素離體處理肝細胞后,PEDF的表達顯著升高。3.PEDF促進甘油三酯降解。原核表達出有活性的PEDF重組蛋白,WB檢測顯示HIS標簽標記的外源性的PEDF能夠被細胞攝取,甘油三酯測定結(jié)果表明PEDF促進甘油三酯降解。4.PEDF可以抑制TNFα誘導(dǎo)的肝脂肪變性,并且PPARα參與了這個過程的調(diào)節(jié)。在體注射試驗以及離體細胞試驗均顯示TNFα促進肝細胞的脂質(zhì)蓄積,同時PPARα和PEDF的表達受到抑制。而在加入PPARα激動劑或者PEDF重組蛋白之后,由TNFα造成的甘油三酯蓄積得到了緩解,并且PPARα激動劑提高了PEDF的表達水平。本研究表明PEDF減少脂質(zhì)蓄積,并能抑制TNFα誘導(dǎo)的肝脂肪變性,對維持機體甘油三酯的穩(wěn)態(tài)有直接作用。
【圖文】：

圖 2-3 PEDF 蛋白結(jié)構(gòu)三維模擬預(yù)測圖Fig 2-3 Predicted structures of PEDF注：N 端氨基酸被標記為黃色，C 端氨基酸被標記為綠色。erminal amino acids were labeled as yellow. The C-terminal amino acids we

圖 2-2 PEDF 基因結(jié)構(gòu)示意圖Fig 2-2 Genomic structure of PEDF genes.黑框代表外顯子，陰影部分代表編碼區(qū)，空白區(qū)域代表非編碼區(qū)，內(nèi)含子的長度的下方，而外顯子的長度標注在上方。ons are represented by boxes; shady areas represent the coding region of the gene. Int
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 杜震宇;;養(yǎng)殖魚類脂肪肝成因及相關(guān)思考[J];水產(chǎn)學(xué)報;2014年09期

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本文編號：2663208