【摘要】：為研究處于同一時(shí)期但養(yǎng)殖條件不同的草魚魚體規(guī)格與發(fā)育狀態(tài)間是否具有一致性,本實(shí)驗(yàn)觀察了出膜后開始高密度、低投喂的壓塘3月齡草魚與正常養(yǎng)殖的普通3月齡草魚頭腎、中腎、腸道和脾臟的顯微結(jié)構(gòu),并對其進(jìn)行疫苗腹腔注射處理,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測免疫7 d后、14 d后不同規(guī)格魚體的頭腎、中腎、腸道和脾臟中IgM與MHCⅠ的相對表達(dá)量,觀察了免疫前后IgM陽性細(xì)胞在四個(gè)組織當(dāng)中的分布變化情況,結(jié)果顯示:壓塘魚頭腎處于功能多樣的混合型腎臟及分泌組織階段;中腎單位大多還處于發(fā)育中或亞成熟狀態(tài);腸道中可觀察到大量粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞;脾臟已具有一定的免疫功能,但還未未分化為明顯的紅髓和白髓。普通魚頭腎中有大量不規(guī)則分布的淋巴細(xì)胞;此時(shí)的部分中腎細(xì)胞開始表現(xiàn)出與成體相似的細(xì)胞形態(tài);腸道粘膜組織中與免疫相關(guān)的細(xì)胞在數(shù)量上也進(jìn)一步增加;脾臟中可見相互間界限不明的紅髓和白髓混合排列,已具有成熟的組織結(jié)構(gòu)。免疫后草魚IgM在普通魚免疫14 d后的各組織中高表達(dá),其中頭腎(24.07倍,P0.01)、中腎(74.51倍,P0.01)、脾臟(60.31倍,P0.01)中相對表達(dá)量比腸道中高很多。并且兩種草魚各自的頭腎、中腎和脾臟中的IgM相對表達(dá)量也高于其腸道。頭腎中的MHCⅠ相對表達(dá)量在壓塘魚免疫14 d后最高(12.73倍,P0.01);中腎中的表達(dá)量在普通魚免疫14 d后最高(56.02倍,P0.01);腸道中的表達(dá)量在壓塘魚免疫7 d后最高(2.16,P0.05);脾臟中的表達(dá)量在普通魚免疫14 d后最高(12.45,P0.05)。在免疫后的14 d內(nèi),壓塘魚MHCⅠ除在頭腎中的相對表達(dá)量增幅變大外,中腎、腸道和脾臟中的MHCⅠ相對表達(dá)量增幅均有所下降,而普通魚在免疫后的14 d內(nèi),各組織中的MHCⅠ相對表達(dá)量的增幅都有升高。經(jīng)草魚出血病活疫苗(GCHV-892株)免疫前IgM陽性細(xì)胞在頭腎中數(shù)量最多,脾臟和中腎中含量不一,在腸道中幾乎沒有或很少。免疫后各組織中IgM陽性細(xì)胞部分出現(xiàn)增多現(xiàn)象,以普通魚免疫14 d后的中腎增幅最大。頭腎和脾臟中的IgM陽性細(xì)胞數(shù)在普通魚免疫14 d后也都有大幅度增加現(xiàn)象,但腸道中的IgM陽性細(xì)胞數(shù)在免疫前后的各時(shí)期中變化都不大。結(jié)果表明,處于同一時(shí)期但養(yǎng)殖條件不同的壓塘魚與普通魚間各組織發(fā)育狀況存在較大差異,魚體規(guī)格與發(fā)育狀況具有一致性,正常養(yǎng)殖的普通魚各免疫相關(guān)組織發(fā)育相對成熟,可以進(jìn)行免疫。
【圖文】：

圖 2-1. IgM 與 MHCⅠ在不同組織中的相對表達(dá)量Figure 2-1. The expression of IgM and MHCⅠin different tissues.a.壓塘魚免疫7 d 后 IgM 在各組織中的表達(dá)量 b.壓塘魚免疫 7 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達(dá)量c.壓塘魚免疫14 d 后 IgM 在各組織中的表達(dá)量 d.壓塘魚免疫14 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達(dá)量 e.普通魚免疫 7 d 后IgM 在各組織中的表達(dá)量 f.普通魚免疫 7 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達(dá)量 g.普通魚免疫 14 d 后 IgM 在各組織中的表達(dá)量 h.普通魚免疫 14 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達(dá)量(“*”表示差異顯著，“**”表示差異極顯著) a. The expression of IgM in different tissues ondays 7 after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp. b.The expression ofMHCⅠin different tissues on days 7 after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grasscarp. c. The expression of IgM in different tissues on days 14 after injection of high-density,low-feeding 3-month-old grass carp. d.The expression of MHCⅠin different tissues on days 14 afterinjection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp.e. The expression of IgM in differenttissues on days 7 after injection of common 3-month-old grass carp. f. The expression of MHCⅠindifferent tissues on days 7 after injection of common 3-month-old grass carp. g. The expression ofIgM in different tissues on days 14 after injection of common 3-month-old grass carp. h. Theexpression of MHCⅠin different tissues on days 14 after injection of common 3-month-old grasscarp.(“*”：P＜0.05，“**”：P＜0.01)

圖 3-1.各組織中 IgM 陽性細(xì)胞密度Figure 3-1. The density of positive cells of IgM in different tissues.Ⅰ7 代表壓塘魚免疫 7 d 后,Ⅰ14 代表壓塘魚免疫 14 d 后,Ⅱ7 代表普通魚免疫 7 d 后,Ⅱ14 代表普通魚免疫 14 d 后.Ⅰ7 for days 7 after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp, Ⅰ14 for days 14after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp,Ⅱ7 for days 7 after injection ofcommon 3-month-old grass carp,Ⅱ14 for days 14 after injection of common 3-month-old grass carp.4 討論本實(shí)驗(yàn)利用免疫組化技術(shù)對 B 淋巴細(xì)胞所特有的免疫球蛋白 M（IgM）進(jìn)行了定位和定量，觀察發(fā)現(xiàn)：在未經(jīng)免疫的壓塘魚和普通魚中，IgM 陽性細(xì)胞在頭腎中數(shù)量最多，脾臟和中腎次之，在腸道中幾乎沒有或很少。說明草魚頭腎是主要的免疫器官，而中腎和脾臟是次級免疫器官，這與雷雪彬[153]對草魚免疫細(xì)胞的觀察結(jié)果是一致的。腸道后段雖已證具有免疫功能，但作用不明顯。經(jīng)草魚出血病活疫苗(GCHV-892 株)注射免疫后的草魚各組織中，IgM 陽性細(xì)胞多表現(xiàn)出數(shù)量增多現(xiàn)象，其中以普通魚免疫 14 d 后的中腎增幅最大。頭腎和脾臟中的 IgM 陽性
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4

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本文編號：2654365