【摘要】：作為補(bǔ)體系統(tǒng)的中心成分,補(bǔ)體C3在整個(gè)補(bǔ)體系統(tǒng)的激活中起著重要作用。補(bǔ)體C3蛋白在無脊椎動物對病原微生物的免疫防御中扮演著重要的角色。本文研究了溫度對刺參AjC3 mRNA和MicroR-137在體腔液、腸和呼吸樹中表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)將飼養(yǎng)在8℃、16℃、23℃的海水中的刺參用2μg/μl的脂多糖100μl注射刺激,分別在3h、6h、9h、12h、24h在低溫滅菌條件下提取體腔液、腸和呼吸樹的總RNA,質(zhì)量合格后將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA;設(shè)計(jì)細(xì)胞色素b及AjC3 mRNA和MicroR-137的引物,分別以體腔液、腸和呼吸樹的cDNA為模板,檢測體腔液中AjC3 mRNA和MicroR-137的含量。結(jié)果顯示:經(jīng)脂多糖刺激之后AjC3 mRNA在仿刺參體腔液、呼吸樹、腸3個(gè)組織中均有表達(dá),其中體腔液中含量最多,腸次之,呼吸樹中最少;LPS刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AjC3mRNA在體腔液、呼吸樹和腸中各時(shí)間段表達(dá)量變化均呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢。且體腔液、呼吸樹和腸中AjC3 mRNA表達(dá)量在9h達(dá)到峰值。LPS刺激8℃組刺參、16℃組和23℃組刺參24h過程中,體腔液、呼吸樹和腸中MicroR-137均有表達(dá),且表達(dá)量變化趨勢總體相似,為先降低后升高,但具體的變化幅度差別較大。8℃組刺參在刺激6h時(shí)表達(dá)量極顯著下降(p0.01),在9h達(dá)到最低值。16℃組刺參在9h前后階段表達(dá)量變化不顯著(p0.05)。23℃組中各組織也是在9h前后階段表達(dá)差異顯著(p0.05),先上升后下降。但是各個(gè)組織進(jìn)行比較,體腔液中16℃MicroR-137含量呈現(xiàn)先下降后增高的趨勢比較明顯,23℃與8℃MicroR-137會在9h下降但是在9h后MicroR-137含量還會發(fā)生輕微浮動;在腸和呼吸樹中,23℃組、16℃組和8℃組中MicroR-137含量會在9h下降,在下降之后的時(shí)間段內(nèi),MicroR-137的含量還會發(fā)生上升和下降的變化。不同溫度下,AjC3 mRNA和MicroR-137的表達(dá)量不同;低溫和高溫對刺參的免疫反應(yīng)有抑制作用,AjC3 mRNA被脂多糖刺激后表現(xiàn)出上升時(shí),MicroR-137都會表現(xiàn)出下降:在體腔液中AjC3 mRNA呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,而MicroR-137則呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢,且在體腔液內(nèi)AjC3 mRNA含量變化明顯,在腸和呼吸樹中MicroR-137含量變化規(guī)律不明顯,體腔液、腸和呼吸樹的變化明顯程度依次降低;AjC3 mRNA與MicroR-137的相關(guān)性(AjC3 mRNA上升時(shí)MicroR-137下降)上,體腔液中二者相關(guān)性最高,其次是腸,最后是呼吸樹。說明溫度影響AjC3 mRNA的表達(dá),高溫或低溫都會抑制AjC3 mRNA的表達(dá),但溫度對MicroR-137的表達(dá)影響不明顯;MicroR-137和AjC3 mRNA之間存在負(fù)相關(guān)性,可能調(diào)控AjC3 mRNA的表達(dá),參與免疫反應(yīng);不同組織中MicroR-137和AjC3 mRNA相關(guān)性不同,體腔液中MicroR-137和AjC3 mRNA相關(guān)性最高,腸次之,呼吸樹MicroR-137和AjC3 mRNA相關(guān)性最低。
【圖文】：

位點(diǎn)；硫酯位點(diǎn)是決定C3活性的關(guān)鍵位點(diǎn)。C3跟靶細(xì)胞表面一些的氨基、羥基通過共價(jià)形式結(jié)合這圖2 補(bǔ)體C3 就能粘附。病原體、腫瘤細(xì)胞和免疫復(fù)合物。像國Figure2 Complement component C3 外許多實(shí)驗(yàn)室對其進(jìn)行了深入的研究，硫酯鍵其實(shí)是

RNA 聚合酶Ⅱ的啟動子序列，少數(shù)的病毒基因轉(zhuǎn)錄生成的 pri-microⅢ的轉(zhuǎn)錄特性，之后，很多研究表明 RNA 聚合酶Ⅱ啟動子引導(dǎo)了 mic某些轉(zhuǎn)錄因子也可能夠結(jié)合到 microRNA 基因上游特異性位點(diǎn)來調(diào)節(jié)子活性，，從而也影響 microRNA 基因相應(yīng)的表達(dá)。Pri-microRNA 需要成比較成熟的 microRNA。動物的 pri-microRNA 第一次剪切處于細(xì)胞Dorsha 酶剪切形成大小為 70 個(gè)核苷酸通過一些結(jié)構(gòu)變化能形成莖-環(huán)體結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)被稱為 pre-microRNA；第二次反應(yīng)過程處于細(xì)胞A 被一種叫做 Dicer 的酶剪切成大小為 21-23 個(gè)核苷酸的 microRNA[41成熟過程與動物的不同,沒有 Drosha 的同源物。研究者通過對擬南芥的能以一個(gè)或多個(gè) Dicer 酶來替代 Drosha 的功能[42,43]。根據(jù)這些，研究的 microRNA 好像是在細(xì)胞核內(nèi)成熟。圖 1 microRNA 在動物(a)和植過 程 ( 引 自 Zeng Y.Principles of micro-RNA productioncogene,2006,25 (46):6156-6162) 在具有 microRNA 特征的動物體內(nèi),mic些特點(diǎn)：RNA 分子結(jié)構(gòu)由長度 21-25nt 范圍內(nèi)較小的內(nèi)源性表達(dá)的 R
【學(xué)位授予單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4

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本文編號：2651266