【摘要】：中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征,俗稱“水癟子”病,該病從春季到秋季均有發(fā)生,發(fā)病高峰期是夏季高溫天氣,幼蟹到成蟹均可發(fā)生感染,且死亡率較高,已成為制約中華絨螯蟹養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的重要因素。本研究通過對江蘇省中華絨螯蟹主養(yǎng)區(qū)的中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征流行病學(xué)調(diào)查、病原檢測、組織病理學(xué)研究及病蟹組織和環(huán)境菌群多樣性分析,旨在揭示中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征流行情況、潛在病原種類、病變特征及肝胰腺病變前后細(xì)菌菌群多樣性,為中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征防控提供一定的參考。主要研究內(nèi)容如下:(1)中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征流行病學(xué)調(diào)查研究。對江蘇省中華絨螯蟹主養(yǎng)區(qū)進(jìn)行定點追蹤采樣,詳細(xì)記錄疾病發(fā)生情況,分析2018年中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征在養(yǎng)殖生產(chǎn)中的發(fā)生特點與流行規(guī)律。結(jié)果表明:2018年中華絨螯蟹肝胰腺病綜合征發(fā)生較少,只在夏季高溫季節(jié)部分送樣點有散發(fā)性發(fā)生。(2)中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征潛在病原檢測研究。對中華絨螯蟹的鰓、肝胰腺和腸道進(jìn)行白斑綜合征病毒、肝腸孢子蟲、微孢子蟲和螺原體檢測,對病蟹肝胰腺組織進(jìn)行細(xì)菌分離和致病性試驗。結(jié)果表明:健康中華絨螯蟹和病蟹均可檢測出白斑綜合征病毒,健康中華絨螯蟹可檢測出肝腸孢子蟲,微孢子蟲、螺原體檢測均為陰性;白斑綜合征病毒、微孢子蟲、肝腸孢子蟲、螺原體這四類潛在病原與中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征的發(fā)生可能無關(guān);自發(fā)病中華絨螯蟹分離鑒定的嗜水氣單胞菌和弗氏檸檬酸桿菌對中華絨螯蟹均具有致病性,LD50 分別為 5.4×105 CFU/mL 和 3.2×106 CFU/mL。(3)中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征組織病理學(xué)研究。通過常規(guī)石蠟切片、HE染色,對患肝胰腺病變綜合征的中華絨螯蟹各個組織制備病理切片,同時以健康中華絨螯蟹的相應(yīng)組織作對照,顯微鏡觀察分析其發(fā)病整個過程中各組織的變化情況。結(jié)果表明:肝胰腺、鰓和肌肉等組織均發(fā)生不同程度的破壞和病變,其中肝胰腺組織損傷最大。發(fā)病中華絨螯蟹肝小管間的血細(xì)胞數(shù)量增多,基膜破裂,部分肝小管發(fā)生水腫、變性,細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊,空泡變大;發(fā)病中華絨螯蟹鰓葉增厚,上皮細(xì)胞排列不規(guī)則,數(shù)量眾多的血細(xì)胞充擠于血腔,角質(zhì)膜呈波狀拱起,部分角質(zhì)膜與上皮細(xì)胞層分離形成大的空泡,鰓葉間有少量的雜質(zhì)污物;發(fā)病中華絨螯蟹肌纖維松散,部分肌纖維斷裂,橫紋模糊。(4)病蟹與健康蟹及水樣、泥樣微生物菌群多樣性分析。取中華絨螯蟹鰓、肝胰腺、腸道組織、養(yǎng)殖用水及底泥,進(jìn)行宏基因組高通量測序分析,分析發(fā)病中華絨螯蟹養(yǎng)殖區(qū)各組織、水體及底泥的微生物菌群狀況,并與健康中華絨螯蟹及環(huán)境微生物群落進(jìn)行比較。結(jié)果表明:不同分類水平上,各組織菌群組成存在較大的差異。健康中華絨螯蟹各組織中優(yōu)勢菌群趨勢為:厚壁菌門、無壁菌門、變形菌門、擬桿菌門;肝胰腺病變綜合征各組織優(yōu)勢菌群趨勢為:變形菌門、厚壁菌門、無壁菌門。健康中華絨螯蟹水體及底泥的優(yōu)勢菌群為:變形菌門,擬桿菌門、放線菌門、厚壁菌門、疣微菌門;發(fā)病中華絨螯蟹水體及底泥的優(yōu)勢菌群種類與健康中華絨螯蟹水體及底泥的優(yōu)勢菌群基本一致。發(fā)病中華絨螯蟹鰓組織與健康中華絨螯蟹相比,變形菌門、放線菌門含量減少,擬桿菌門含量增加;發(fā)病中華絨螯蟹肝胰腺組織中變形菌門含量減少,厚壁菌門、擬桿菌門含量增加,增加了綠彎菌門和疣微菌門;發(fā)病中華絨螯蟹腸道組織中擬桿菌門、變形菌門含量增加,無壁菌門含量下降。研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示中華絨螯蟹肝胰腺病變綜合征發(fā)生的原因提供理論參考。
【圖文】：

逡逑部分樣品電泳圖如圖３－１逡逑Ｍ邋２７２８２９３０３１３２３３３４＾５３６３７邋３８３９４０逡逑１邋＾邋＇逡逑圖３－１白斑綜合癥病毒ＷＳＳＶＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｒｕｓ逡逑注：２９，３０，邋３１，邋３２，３４，邋３７，邋３８，邋３９，４０為白斑綜合癥病毒陽性樣品條帶；逡逑２７，邋２８，邋３３，邋３５，邋３６為白斑綜合癥病毒陰性樣品條帶。逡逑Ｎｏｔｅ：邋２９，邋３０，邋３１，邋３２，邋３４，邋３７，３８，邋３９，邋４０邋ａｒｅ邋ｓｔｒｉｐｓ邋ｏｆ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｍｓ；逡逑２７，邋２８，邋３３，邋３５，邋３６邋ａｒｅ邋ｓｔｒｉｐｓ邋ｏｆ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｒｕｓ．逡逑３．邋２．邋２微孢子蟲檢測逡逑檢測微孢子蟲的中華絨螯蟹樣品５７個（除去興化和武進(jìn)現(xiàn)場采樣的１１個樣品），部分逡逑電泳圖見圖３－２。由實驗結(jié)果可知，中華絨螯蟹樣品微孢子蟲檢測均為陰性。逡逑Ｍ邋１邋２邋３邋４邋＋逡逑ｂｐ逡逑２０００１逡逑ｌｏｏｏＨＩ邐＇逡逑７５０逡逑５００邋■逡逑２５０邋■邐，逡逑１００邋Ｉ逡逑圖３－２微孢子蟲ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－２邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ逡逑注：１

逡逑部分樣品電泳圖如圖３－１逡逑Ｍ邋２７２８２９３０３１３２３３３４＾５３６３７邋３８３９４０逡逑１邋＾邋＇逡逑圖３－１白斑綜合癥病毒ＷＳＳＶＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｒｕｓ逡逑注：２９，３０，邋３１，邋３２，３４，邋３７，邋３８，邋３９，４０為白斑綜合癥病毒陽性樣品條帶；逡逑２７，邋２８，邋３３，邋３５，邋３６為白斑綜合癥病毒陰性樣品條帶。逡逑Ｎｏｔｅ：邋２９，邋３０，邋３１，邋３２，邋３４，邋３７，３８，邋３９，邋４０邋ａｒｅ邋ｓｔｒｉｐｓ邋ｏｆ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｍｓ；逡逑２７，，邋２８，邋３３，邋３５，邋３６邋ａｒｅ邋ｓｔｒｉｐｓ邋ｏｆ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｒｕｓ．逡逑３．邋２．邋２微孢子蟲檢測逡逑檢測微孢子蟲的中華絨螯蟹樣品５７個（除去興化和武進(jìn)現(xiàn)場采樣的１１個樣品），部分逡逑電泳圖見圖３－２。由實驗結(jié)果可知，中華絨螯蟹樣品微孢子蟲檢測均為陰性。逡逑Ｍ邋１邋２邋３邋４邋＋逡逑ｂｐ逡逑２０００１逡逑ｌｏｏｏＨＩ邐＇逡逑７５０逡逑５００邋■逡逑２５０邋■邐，逡逑１００邋Ｉ逡逑圖３－２微孢子蟲ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－２邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ逡逑注：１
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S945

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本文編號：2613995