【摘要】：截短側耳素是一類廣譜抗生素,是由高等真菌產生的三環(huán)二萜烯類化合物。而通過截短側耳素類前體合成的抗生素主要包括沃尼妙林(Valnemulin,VLM)及泰妙菌素(Tiamulin,TML)等,以上抗生素的結構上有五元環(huán)、八元環(huán)上的羰基、C-14位上的�；癈-11位上的羥基等基團。沃尼妙林主要是通過在家禽、水產品等體內與病原微生物核糖體的50S亞基相結合,從而與病原體23SrRNA的V區(qū)位作用,阻止病原體的肽基轉移酶在CCA-末端的正確定位,進而抑制蛋白質的生成,達到使病原體死亡的目的。泰妙菌素主要對支原體、豬密螺旋型痢疾、脲原體感染、豬放線菌性胸膜肺炎、腸道螺旋體病、豬肺炎霉形體等具有良好效果。沃尼妙林的毒性低,無致癌、致畸、致突變及繁殖毒性,且無免疫系統(tǒng)損害。因截短側耳素類抗生素能夠有效作用于腸道螺旋體、支原體及革蘭氏陽性菌,所以目前被廣泛用于魚類等水產品及豬、牛等陸地家禽疾病的預防與治療。本文的受試動物為鯽魚(Carassius auratus)。在實驗條件下建立了適用于魚體內沃尼妙林和泰妙菌素殘留的檢測方法,并進一步探究了這兩種截短側耳素類抗生素在鯽魚體內富集與釋放的規(guī)律。主要研究內容如下:1.通過對提取試劑的比較,凈化條件的優(yōu)化,色譜條件以及質譜條件的優(yōu)化,建立了適用于魚體內沃尼妙林和泰妙菌素殘留的檢測方法。鯽魚各組織樣品用2%甲酸-乙腈超聲提取后,經(jīng)Oasis MCX SPE小柱凈化,采用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)測定,沃尼妙林和泰妙菌素分別采用外標法定量,內標法定量。以含有0.05%甲酸的乙酸銨水溶液作為流動相,梯度洗脫分離,電噴霧正離子多反應監(jiān)測模式監(jiān)測。結果表明,這兩種截短側耳素類抗生素在5~1000 ng/mL內呈現(xiàn)良好的線性關系。沃尼妙林和泰妙菌素的檢出限和定量限分別為0.03μg/kg和0.1μg/kg。在0.1、1.0、5.0、10.0、50.0μg/kg五種添加水平條件下,成年鯽魚肌肉中沃尼妙林和泰妙菌素的平均回收率為96.72%~113.78%,相對標準偏差為1.02%~3.68%;肝臟中沃尼妙林和泰妙菌素的平均回收率為99.23%~115.43%,相對標準偏差為2.60%~7.06%;腸中沃尼妙林和泰妙菌素的平均回收率為80.35%~111.41%,相對標準偏差為1.68%~7.24%;批間相對標準偏差為2.26%~9.10%,均小于10.0%,符合實驗的要求。本方法操作簡單,耗時少,重復性好,靈敏度高,實樣檢測結果表明該方法適合鯽魚體內沃尼妙林和泰妙菌素的實際測定。2.應用腹腔注射的給藥方式,分別在不同的時間節(jié)點取出鯽魚各組織,經(jīng)超高效液相色譜串聯(lián)四級桿及飛行時間質譜(UPLC/Q TOF MS)分析,結合各代謝物的相對分子質量以及相關文獻,確定泰妙菌素在鯽魚體內產生五種代謝物,分別是M1(510.2908,C_(28)H_(48)NO_5S~+)、M2(510.2908,C_(28)H_(48)NO_5S~+)、M3(466.2750,C_(26)H_(44)NO_4S~+)、M4(482.2663,C_(26)H_(44)NO_5S~+)和M5(482.2663,C_(26)H_(44)NO_5S~+)。M1和M2是同分異構體;M4和M5也是同分異構體,但同時也是M3的代謝物,是泰妙菌素的二級代謝產物。沃尼妙林在鯽魚體內產生三種代謝物V1(581.3182,C_(31)H_(52)N_2O_6S)、V2(581.3182,C_(31)H_(52)N_2O_6S)和V3(597.0903,C_(31)H_(52)N_2O_7S),V1和V2是同分異構體;因文獻以及實驗儀器的局限性,具體結構還未確定。沃尼妙林和泰妙菌素的靶器官均為肝臟,經(jīng)膽囊排出體外。代謝物在其他各組織中也都存在。沃尼妙林的三種代謝物更多的出現(xiàn)在膽囊和皮膚中。除此之外,沃尼妙林和泰妙菌素在不同物種之間產生的代謝物也不同。3.應用藥浴方法,探究沃尼妙林和泰妙菌素以及兩者的代謝物在鯽魚苗體內的富集和代謝規(guī)律。結果表明,泰妙菌素主要的代謝產為M1(8α-OH-TML)、M3(N-deethly-TML)和M4(8α-OH-N-deethly-TML),沃尼妙林主要的代謝產物為V1(8α-OH-VLM或2β-OH-VLM)和V2(2β-OH-VLM或8α-OH-VLM),主要代謝途徑是母核羥基化。由此斷定,泰妙菌素在鯽魚體內的潛在標志殘留物是8α-OH-TML、N-deethly-TML和8α-OH-N-deethly-TML;沃尼妙林在鯽魚體內的潛在標志殘留物是8α-OH-VLM和2β-OH-VLM。在富集階段,沃尼妙林和泰妙菌素的含量都是呈現(xiàn)鋸齒狀升高,在飽和階段呈現(xiàn)波動性平穩(wěn),在最后的釋放階段呈現(xiàn)下降的趨勢。整個過程呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。沃尼妙林和泰妙菌素在鯽魚苗體內的生物富集系數(shù)分別為1.23,3.01,泰妙菌素的生物富集系數(shù)大于沃尼妙林的生物富集系數(shù),泰妙菌素的富集速率更快一些,但是兩種物質在2天之內都能達到飽和。沃尼妙林和泰妙菌素在鯽魚體內的半衰期分別為4.28天,3.74天,泰妙菌素的消除速率要快于沃尼妙林。且兩種藥物凈化的第二周,都沒有消除完全;腹腔注射兩種藥物,其在各組織中的藥物基本都能在一天之內消除完全。結果表明,不同種給藥途徑,兩種藥物在體內的代謝規(guī)律不一樣,腹腔注射的給藥途徑要比藥浴第七天停藥后代謝快得多。
【圖文】：

圖 1-1 沃尼妙林結構式Fig. 1.1 The structure of valnemulin沙星、泰樂菌素等藥物，更不易產葡萄球菌、雞敗血霉形體、牛霉形疾短螺旋體等均有較好的作用[12,13疾、腹瀉等疾病具有良好防治作用理主要是通過在家禽、水產品等體病原體 23SrRNA 的 V 區(qū)位作用，，進而抑制蛋白質的生成，，達到使林是通過結合病原體的 23 位 S 基，在列腺素 E2、一氧化氮、腫瘤壞死因化酶 2 等，引起白細胞介素-6 的表氨基末端激酶等的正常作用，從而尼妙林的毒性低，無致癌、致畸、、雄性小鼠、雌性小鼠的半數(shù)致死

圖 1-2 泰妙菌素結構式Fig. 1.2 The structure of tiamulin、豬密螺旋型痢疾、脲原體感染體、雞敗血霉形體、金黃色葡萄節(jié)炎等具有良好效果。其結構上基及 C-14 位上的�；鶎ζ淇咕_規(guī)定泰妙菌素及其代謝物質別為 100 μg/kg、500 μg/kg，而 8量分別為 100 μg/kg、1000 μg物脂肪、肝臟、肌肉中的最高殘留
【學位授予單位】：浙江海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S948

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本文編號：2609017