煙草是一種重要的經(jīng)濟作物,因其煙葉中富含多酚、茄尼醇、煙堿等多種有益成分而具有重要的醫(yī)藥價值。其中茄尼醇是一些重要藥物的中間體,可用于合成輔酶Q10和維生素K2等泛醌類藥物和抗癌增效劑SDB。目前,醫(yī)藥上利用的茄尼醇主要來源于廢棄煙葉,因此對煙草茄尼醇的生物合成進行研究,對茄尼醇含量的調控具有重要的意義。本研究利用超高效液相色譜和實時定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法,測定了茄尼醇含量差異顯著的煙草品種紅花大金元(含量高)和中煙90(含量低)6個發(fā)育時期根、莖、葉中茄尼醇含量以及萜類代謝關鍵酶基因的表達,分析了茄尼醇積累與各關鍵酶基因表達的相關性。另外,通過克隆得到了煙草茄尼基焦磷酸合酶的基因,并對基因序列進行了生物信息學分析,最后通過構建過表達載體,對該基因的功能進行了研究。主要的研究結果如下:(1)茄尼醇在紅花大金元和中煙90的6個取樣時期茄尼醇含量:葉>莖>根。兩品種中7種萜類關鍵酶基因表達模式不盡相同,FPS、DXR、IPI、SPS、GGPPS基因的表達從苗期至開花期表達量逐漸上升,在根中至現(xiàn)蕾期表達量最高,在莖、葉中開花期最高,隨后迅速下降。相關性分析表明,DX...

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【學位級別】：碩士

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圖1萜類合成途徑（申培林，2011）

圖1萜類合成途徑（申培林，2011）Fig.1ThepathwayofTerpenesynthesis1.2.3萜類合成途徑中的關鍵酶現(xiàn)在對于萜類化合物合成途徑現(xiàn)在已經(jīng)基本清楚（張偉，2014），現(xiàn)在研究比較多的是萜生物合成過程中的關鍵酶類，萜類化合物的生物合成大....

圖7NtSPS基因的菌液PCR擴增Fig.7PCRanalysisofNtSPS

1000bp圖6NtSPS基因的PCR擴增Fig.6PCRanalysisofNtSPS.2目的片段的驗證（1）菌液PCR驗證將此PCR產(chǎn)物進行切膠回收，然后將得到的目的片段連接到pEASYTM-BluntZero克把重組載體轉化TransT1....

圖8SPS基因的質粒PCR擴增Fig.8PlasmidPCRanalysisofNtSPS

證證切膠回收，然后將得到的目的片段連接到pEASransT1感受態(tài)細胞，挑取陽性菌落，進行菌液PCR成功連接到克隆載體上，大部分的菌落均為陽性菌圖7NtSPS基因的菌液PCR擴增Fig.7PCRanalysisofNtSPS證的條帶的陽性菌落，將陽性菌落進....

圖11煙草NtSPS1基因的親水性/疏水性預測

中國農業(yè)科學院碩士學位論文第三章煙草茄尼基焦磷酸合酶（NtSPS）基因的克隆

本文編號：3972095