轉(zhuǎn)基因安全管理和標(biāo)識(shí)制度的實(shí)施需要標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)方法和轉(zhuǎn)基因檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是獲得準(zhǔn)確、可靠、可比檢測(cè)結(jié)果的保證。轉(zhuǎn)基因玉米T25為我國(guó)批準(zhǔn)進(jìn)口用作加工原料的轉(zhuǎn)基因植物。為加強(qiáng)對(duì)T25的監(jiān)管,以T25基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為研究對(duì)象,建立數(shù)字PCR方法,并選擇8家實(shí)驗(yàn)室,采用數(shù)字PCR聯(lián)合定值測(cè)定。結(jié)果表明,T25/Adh1二重?cái)?shù)字PCR系統(tǒng)具有良好的擴(kuò)增特異性。初始模板量在100～10 000拷貝·μL^-1之間可獲得穩(wěn)定、可靠的檢測(cè)結(jié)果。通過多實(shí)驗(yàn)室協(xié)同定值說明T25/Adh1二重?cái)?shù)字PCR方法準(zhǔn)確、可靠。T25基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值為1.001 2,相對(duì)不確定度為0.001 6。研究表明建立的T25/Adh1二重?cái)?shù)字PCR方法可以用于轉(zhuǎn)基因玉米T25的定量檢測(cè),為轉(zhuǎn)基因成分定量檢測(cè)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)保證。

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【部分圖文】：

圖1T25的PCR擴(kuò)增圖譜

參照農(nóng)業(yè)部869號(hào)公告-14-2007《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)耐除草劑玉米T25及其衍生品種定性PCR方法》[13]進(jìn)行PCR檢測(cè)。PCR結(jié)果(圖1)顯示,陰性對(duì)照和空白對(duì)照的T25基因檢測(cè)結(jié)果均為陰性;5～10號(hào)樣品的T25基因檢測(cè)結(jié)果為陽性,含有T25轉(zhuǎn)化體,但是無法滿....

圖2T25和Adh1二重?cái)?shù)字PCR特異

不同玉米品種的T25/Adh1二重?cái)?shù)字PCR檢測(cè)結(jié)果(圖2)顯示,Adh1基因在空白對(duì)照中無陽性微滴,但在轉(zhuǎn)基因玉米MON863、MON810、NK603、MIR604、TC1507和非轉(zhuǎn)基因玉米NTC中均擴(kuò)增正常。在Adh1基因擴(kuò)增正常的情況下,T25基因只有在轉(zhuǎn)基因玉米T25....

圖3數(shù)字PCR的動(dòng)力學(xué)范圍測(cè)試

微滴式數(shù)字PCR的理論有效線性范圍是1～120000個(gè)拷貝,但20μL反應(yīng)液在微滴生成器中只能產(chǎn)生12000～16000個(gè)有效微滴,微滴數(shù)大于10000為有效反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)DNA模板量為1.8×105拷貝時(shí),所有微滴均呈陽性,超出數(shù)字PCR的動(dòng)力學(xué)范圍。其他濃度微滴....

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