蓖麻屬大戟科一年生或多年生雙子葉草本植物,是可再生生物能源的優(yōu)質材料。花青素是屬于酚類化合物中的類黃酮家族的天然色素,對植株體顏色的形成、提高植物的耐逆境脅迫能力有重要作用。進行蓖麻莖色調節(jié)基因的篩選與開發(fā)高抗蓖麻新種質對于蓖麻抗逆育種有重要意義,也為其他作物抗逆育種提供新的視角。本研究采用轉錄組測序技術,以紅莖蓖麻（3921）與綠莖蓖麻（1101）雜交后的F₂代極端個體的蓖麻葉片為材料進行測序,從中篩選了2個與蓖麻花青素合成相關的R2R3-MYB轉錄因子基因,并對這兩個基因進行了克隆、生物信息學分析、瞬時表達研究以及功能鑒定。主要研究結果如下:1. 轉錄組結果顯示,共鑒定到差異表達基因841個,其中上調表達差異基因343個,下調表達基因498個。對這些差異表達基因進行功能注釋、GO分析與KEGG富集分析發(fā)現,富集基因最多的類別是生物過程類,其次是分子功能類,最少是細胞組分類;共有96個差異基因富集到代謝通路中,其中主要富集的代謝通路為苯丙烷類生物合成和苯丙氨酸代謝通路。進一步篩選到類黃酮生物合成途徑相關基因84條,有11條基因在紅莖與綠莖蓖麻間差異表達,其中Rc... 

【文章頁數】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 植物色素與花青素
    1.2 花青素的作用
    1.3 花青素的生物合成
    1.4 影響花青素合成的因素
        1.4.1 結構基因對花青素合成的影響
        1.4.2 調節(jié)基因對花青素合成的影響
        1.4.3 pH對花青素合成的影響
        1.4.4 光照對花青素合成的影響
        1.4.5 糖與激素對花青素合成的影響
        1.4.6 蓖麻莖色研究現狀
    1.5 本研究的目的意義
2 蓖麻葉片轉錄組測序
    2.1 植物材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 植物葉片總RNA提取
        2.2.2 文庫構建
        2.2.3 上機測序
        2.2.4 數據分析
        2.2.5 實時熒光定量PCR驗證
    2.3 結果與分析
        2.3.1 蓖麻群體表型分析
        2.3.2 RNA提取結果
        2.3.3 測序數據質量評估
        2.3.4 差異基因的篩選
        2.3.5 GO功能富集分析
        2.3.6 KEGG pathway分析
        2.3.7 蓖麻花青素合成相關結構基因的篩選
        2.3.8 蓖麻花青素合成相關Rc MYBs調節(jié)基因的篩選
        2.3.9 q RT-PCR驗證
3 Rc MYB77與Rc MYB114 基因克隆及功能分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株與載體
    3.2 試劑與培養(yǎng)基配方
        3.2.1 試劑
        3.2.2 培養(yǎng)基配方
    3.3 儀器設備
    3.4 方法
        3.4.1 蓖麻Rc MYB77與Rc MYB114 基因的生物信息學分析
        3.4.2 蓖麻Rc MYB77與Rc MYB114 基因克隆
        3.4.3 蓖麻Rc MYB77與Rc MYB114 過表達載體的構建
        3.4.4 p CAMBIA1302-Rc MYB77與p CAMBIA1302-Rc MYB114 瞬時表達載體的構建
        3.4.5 植物過表達載體p CAMBIA1305.2-Rc MYB77-3*flag與 p CAMBIA1305.2-Rc MYB114-3*flag蓖麻子葉節(jié)遺傳轉化
        3.4.6 植物過表達載體p CAMBIA1305.2-Rc MYB77-3*flag與 p CAMBIA1305.2-Rc MYB114-3*flag轉化擬南芥
        3.4.7 轉基因植株的鑒定
    3.5 結果與分析
        3.5.1 蓖麻Rc MYB77、Rc MYB114 的生物信息學分析
        3.5.2 蓖麻Rc MYB77與Rc MYB114 基因的克隆
        3.5.3 蓖麻p CAMBIA1305.2-Rc MYB77-3*flag與 p CAMBIA1305.2-Rc MYB114-3*flag過表達載體的構建
        3.5.4 p CAMBIA1302-Rc MYB77與p CAMBIA1302-Rc MYB114 瞬時表達載體的構建
        3.5.5 轉基因蓖麻
        3.5.6 轉基因擬南芥
        3.5.7 亞細胞定位分析
4 結論與討論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]辣椒紫色性狀遺傳分析、相關基因克隆和種間雜種創(chuàng)制[D]. 隋益虎.南京農業(yè)大學 2011

碩士論文
[1]卵葉牡丹葉片花青素合成相關MYB篩選、克隆與功能驗證[D]. 段晶晶.西北農林科技大學 2019



本文編號：3717775