近年來,全球變暖引發(fā)的區(qū)域性高溫是導致農作物雄性不育的重要因素之一,并且嚴重威脅農業(yè)生產。研究表明GhCKI在響應高溫導致棉花雄性不育方面具有重要功能,因此為了進一步解析高溫脅迫導致棉花雄性不育的敗育機理,通過酵母雙雜篩選出與GhCKI互作的GhACBP4（acyl-CoA-binding protein 4）蛋白,并且從超表達GhCKI擬南芥花蕾和棉花H05（高溫敏感型）花藥的磷酸化蛋白質組中篩選出3種ACBP4的磷酸化肽段。因此,本研究主要解析GhACBP4在花藥中的功能,主要結果如下:1、經過序列分析發(fā)現,在陸地棉基因組中GhACBP4存在6個同源基因。組織表達模式分析表明Gh_A13G0893/Gh_D13G1134在花藥中優(yōu)勢表達。然而轉基因材料proGh_A13G0893::GUS的組織表達模式表明,該基因在花藥、胚珠和萌發(fā)后的種子中高量表達。而且,高溫誘導表達模式分析表明,在花藥開裂期（ADS,＞24mm花蕾）GhACBP4同源基因總體的表達量受高溫誘導后可能會下調表達。2、綜合比較6個同源基因的表達水平和3種磷... 

【文章頁數】：92 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 文獻綜述
    前言
    1.1 植物雄性生殖器官的發(fā)育
        1.1.1 花藥發(fā)育的細胞學過程
        1.1.2 花藥發(fā)育的分子機制
        1.1.3 花粉壁發(fā)育的過程
    1.2 高溫脅迫對雄性生殖器官的影響
        1.2.1 高溫脅迫下雄性生殖器官的表現
        1.2.2 高溫脅迫導致雄性敗育的機理研究
    1.3 植物ACBP研究概述
    1.4 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體和菌株
    2.2 試驗方法
        2.2.1 提取棉花RNA操作
        2.2.2 RNA反轉操作
        2.2.3 RT-PCR和qRT-PCR
        2.2.4 TTC花粉活性染色液
        2.2.5 透射電鏡
        2.2.6 原核蛋白表達實驗
        2.2.7 雙向電泳
        2.2.8 GUS染色分析
        2.2.9 花藥石蠟切片的制作
        2.2.10 原位雜交
        2.2.11 酵母雙雜
        2.2.12 雙分子熒光互補和亞細胞定位
        2.2.13 雙分子熒光素酶互補實驗
        2.2.14 游離脂肪酸含量測定
        2.2.15 花藥脂質提取和薄層層析
        2.2.16 淀粉含量測定操作
        2.2.17 磷酸化反應和去磷酸化反應
        2.2.18 數據處理
3 結果與分析
    3.1 GhACBP4序列分析
    3.2 GhACBP4的組織表達分析
    3.3 GhACBP4的高溫誘導表達分析
    3.4 GhACBP4轉基因棉花表型鑒定和分子檢測
    3.5 脂肪酸和脂質含量檢測
    3.6 GhACBP4與GhCKI的蛋白互作研究
    3.7 原核表達GhACBP4蛋白
4 討論
    4.1 GhACBP4蛋白可能參與過氧化物酶體脂質代謝
    4.2 RNA干涉GhACBP4導致棉花花藥敗育的機理
    4.3 超表達GhACBP4導致棉花花藥敗育的機理
    4.4 高溫脅迫下GhACBP4導致棉花花藥敗育的機理
5 后續(xù)展望
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]DEX1, a plasma membrane-localized protein, functions in microspore development by affecting CalS5 expression in Arabidopsis thaliana[J]. MA LiJuan,YANG ZhongNan,ZHANG Sen.  Chinese Science Bulletin. 2013(23)
[2]小氣候與棉花敗育的關系[J]. 金桂紅.  南京農業(yè)大學學報. 1985(01)

博士論文
[1]高溫脅迫下棉花花藥發(fā)育表達譜分析及GhCKI基因功能鑒定[D]. 閔玲.華中農業(yè)大學 2013



本文編號：3713235