在植物中,磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白（phosphatiylethanolamine-binding proteins,PEBP）家族被劃分為以下三類,即為FLOWERING LOCUS T（FT）-like、TERMINAL FLOWER1（TFL1）-like和MOTHER OF FT AND TFL1（MFT）-like。FT-like調(diào)節(jié)分生組織有限的生長(zhǎng)和TFL1-like調(diào)節(jié)分生組織無限的生長(zhǎng),并最終影響開花時(shí)間和植株的構(gòu)型。MFT通常被認(rèn)為是FT/TFL1的祖先,但其功能尚不清楚。最近研究揭示了MFT同源基因可能在調(diào)控植物開花和種子萌發(fā)等方面具有十分重要的作用,MFT基因缺失突變體（mft-2）的開花表型不受影響,但對(duì)ABA敏感,其萌發(fā)率較低;而四倍體陸地棉中MFT-like基因的功能還不是很清楚。目的:通過對(duì)GhMFT-like基因的生物信息學(xué)和表達(dá)模式的分析以及轉(zhuǎn)基因擬南芥和棉花的研究,初步確定GhMFT-like基因在調(diào)控棉花胚珠發(fā)育和種子萌發(fā)中的作用。方法:采用RT-PCR技術(shù)進(jìn)行GhMFT-like基因的克隆;構(gòu)建GhMFT-like-GFP融合載體、BD-GhMFT... 

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略表
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 棉花PEBP家族基因的研究進(jìn)展
    1.2 MFT-like的研究進(jìn)展
        1.2.1 MFT-like概述
        1.2.2 MFT-like的功能
        1.2.3 MFT-like的作用的分子機(jī)制
        1.2.4 MFT-like啟動(dòng)子的研究進(jìn)展
    1.3 棉花功能基因組的研究進(jìn)展
    1.4 基因編輯技術(shù)在棉花中的應(yīng)用
        1.4.1 基因編輯技術(shù)概述
        1.4.2 基因編輯技術(shù)在棉花中應(yīng)用
    1.5 本課題的研究意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體和菌種
        2.1.3 試劑
    2.2 方法
        2.2.1 陸地棉PEBP家族基因成員的查找與生物信息學(xué)分析
        2.2.2 棉花和擬南芥RNA的提取
        2.2.3 cDNA第1 鏈的合成
        2.2.4 CTAB法提取植物總DNA
        2.2.5 陸地棉MFT-like基因的克隆
        2.2.6 Gh MFT-like基因啟動(dòng)子的查找和序列分析
        2.2.7 Gh MFT2 基因啟動(dòng)子的克隆
        2.2.8 棉花種子的萌發(fā)實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析陸地棉MFT-like基因的表達(dá)情況
        2.2.10 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.11 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.12 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.13 GhMFT-like蛋白的亞細(xì)胞定位
        2.2.14 酵母感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 陸地棉MFT-like同源基因的克隆和生物信息學(xué)分析
        3.1.1 棉花PEBP家族基因的分析
        3.1.2 Gh MFT1和GhMFT2 基因的克隆和序列分析
        3.1.3 Gh MFT-like啟動(dòng)子的克隆與分析
        3.1.4 Gh MFT-like基因啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)
    3.2 GhMFT-like基因的表達(dá)分析
        3.2.1 Gh MFT-like基因在不同組織中的表達(dá)模式
        3.2.2 Gh MFT-like基因在胚珠和纖維不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)模式
        3.2.3 Gh MFT-like基因的在不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期的葉片中的表達(dá)模式
        3.2.4 Gh MFT-like基因在種子萌發(fā)的不同階段的表達(dá)分析
        3.2.5 Gh MFT-like基因在種子不同激素和NaCl處理下的表達(dá)分析
    3.3 GhMFT-like蛋白的亞細(xì)胞定位以及與GhFD蛋白的互作
        3.3.1 GhMFT-like蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.3.2 酵母雙雜交BD-GhMFT-like載體的構(gòu)建及毒性檢測(cè)
        3.3.3 GhMFT1和Gh MFT2 蛋白與GhFD蛋白的互作
    3.4 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型分析
        3.4.1 植物過量表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.4.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥的鑒定
        3.4.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型分析
        3.4.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥中ABA和 GA信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)分析
        3.4.5 轉(zhuǎn)基因擬南芥在ABA和 NaCl處理下幼苗的生長(zhǎng)狀況
    3.5 棉花的遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因棉花的表型分析
        3.5.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.5.2 Gh MFT-like的棉花遺傳轉(zhuǎn)化
        3.5.3 基于CRISPR/Cas9 技術(shù)的GhMFT-like棉花遺傳轉(zhuǎn)化
        3.5.4 轉(zhuǎn)基因棉花表型的分析
第四章 討論與結(jié)論
    4.1 討論
        4.1.1 陸地棉MFT-like亞家族成員的進(jìn)化分析
        4.1.2 Gh MFT-like參與棉花種子的發(fā)育和萌發(fā)
        4.1.3 GhMFT-like在細(xì)胞中的定位及與GhFD的互作
        4.1.4 異源表達(dá)GhMFT-like抑制擬南芥的萌發(fā)
    4.2 結(jié)論
第五章 創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    5.1 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師評(píng)閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Molecular cloning and functional analysis of the FLOWERING LOCUS T（FT） homolog Gh FT1 from Gossypium hirsutum[J]. Danli Guo,Chao Li,Rui Dong,Xiaobo Li,Xiangwen Xiao,Xianzhong Huang.  Journal of Integrative Plant Biology. 2015(06)

碩士論文
[1]花生AhMFT基因在種子休眠中的作用研究[D]. 葛姍姍.山東師范大學(xué) 2015
[2]花生MFT基因的克隆與功能驗(yàn)證[D]. 朱巖.山東師范大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3648099