茶樹[Camellia sinensis（L.）O.Kuntze]為多年生葉用植物,一年中新梢的多次采摘帶走大量養(yǎng)分,氮是茶樹中含量最高的礦質元素,也是茶葉中多種重要的有機物質組成成分,因而茶樹對氮肥的需求量很高。本研究首先明確了茶樹種質資源的一芽二葉、紅梗綠莖著生葉、麻梗著生葉氮濃度、氮利用效率（Nitrogen Utilization Efficiency,NUtE）、紅梗綠莖著生葉與麻梗著生葉氮再利用效率（Nitrogen Remobilization Efficiency,NRE）在生長季（4月-10月）的動態(tài)變化;本文從PacBio全長轉錄組測序結果鑒定出3個茶樹自噬相關基因（AuTophaGy-related genes,ATG genes）CsATG2、CsATG18f-1與CsATG18f-2,通過遺傳轉化技術獲得了超表達轉基因擬南芥株系,探討茶樹自噬相關基因介導的氮分配、利用效率及再利用效率之間的關系。獲得的主要研究結果如下:（1）茶樹種質資源一芽二葉、紅梗綠莖著生葉、麻梗著生葉的氮濃度在生長季（4月-10月）動態(tài)變化。同一茶樹品種的不同葉位氮濃度表現為一芽二葉>... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數】：91 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 文獻綜述
    1 引言
    2.植物細胞自噬的功能
        2.1 細胞自噬參與植物的生長發(fā)育
        2.2 自噬參與植物免疫反應
        2.3 自噬與營養(yǎng)的循環(huán)利用
    3 實驗的目的和意義
第二章 茶樹種質資源生長季節(jié)不同嫩度葉片氮濃度動態(tài)變化
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗材料
        2.2 主要試劑
        2.3 儀器設備
        2.4 試驗方法
            2.4.1 取樣
            2.4.2 茶樹葉片氮濃度測定方法
        2.5 數據統(tǒng)計
    3 結果與分析
        3.1 茶樹種質資源葉片氮濃度在生長季節(jié)動態(tài)變化
            3.1.1 茶樹種質資源一芽二葉氮濃度在生長季節(jié)動態(tài)變化
            3.1.2 茶樹種質資源紅梗綠莖著生葉氮濃度在生長季節(jié)動態(tài)變化
            3.1.3 茶樹種質資源麻梗著生葉氮濃度在生長季節(jié)動態(tài)變化
        3.2 茶樹種質資源氮利用效率在生長季節(jié)動態(tài)變化
        3.3 茶樹種質資源氮再利用效率(NRE)在生長季節(jié)動態(tài)變化
            3.3.1 茶樹種質資源紅梗綠莖著生葉NRE在生長季節(jié)動態(tài)變化
            3.3.2 茶樹種質資源麻梗著生葉NRE在生長季節(jié)動態(tài)變化
    4 討論
第三章 茶樹自噬相關基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2的分離及氮高效利用
    1.材料
        1.1 植物材料
        1.2 菌株與質粒
        1.3 主要試劑
        1.4 常用培養(yǎng)基及溶液配制
    2 試驗方法
        2.1 茶樹自噬相關基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG8f-2的克隆
            2.1.1 茶樹RNA提取及cDNA的合成
            2.1.2 目的基因的擴增
        2.2 目的基因凝膠回收
        2.3 目的基因片段與p-TOPO載體連接
        2.4 陽性轉化子的鑒定
        2.5 超表達載體及亞細胞定位載體的構建和轉化
            2.5.1 超表達載體的構建和轉化
            2.5.2 亞細胞定位載體的構建和轉化
        2.6 轉基因擬南芥的獲得
            2.6.1 蘸花法侵染擬南芥
            2.6.2 轉基因陽性純合子的篩選
        2.7 植物材料培養(yǎng)
        2.8 亞細胞定位
        2.9 擬南芥根尖自噬小體MDC染色
        2.10 透射電鏡觀察
        2.11 氨基態(tài)氮濃度測定
        2.12 基因表達量的檢測
    3 結果與分析
        3.1 茶樹自噬相關基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2的克隆與表達分析
            3.1.1 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2的cDNA克隆
            3.1.2 茶樹ATG家族進化分析
            3.1.3 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達載體的構建
        3.2 茶樹自噬基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2亞細胞定位
        3.3 茶樹自噬相關基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2對不同氮濃度的響應
            3.3.1 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達擬南芥植株在不同氮水平生長勢差異
            3.3.2 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達擬南芥在蕾薹期氨基態(tài)氮測定
            3.3.3 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達擬南芥對氮吸收轉運基因表達的影響
            3.3.4 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達擬南芥株系在不同氮水平下氮營養(yǎng)累積量測定
            3.3.5 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達擬南芥株系在不同氮水平下自噬小體的檢測
    4 討論
參考文獻
附表1 茶樹轉錄組中自噬相關基因FPKM值
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[4]Environmental Problems From Tea Cultivation in Japan and a Control Measure Using Calcium Cyanamide[J]. K.OH,T.KATO.  Pedosphere. 2006(06)
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博士論文
[1]氮素對茶樹葉片品質成分影響機理研究[D]. 楊亦揚.南京農業(yè)大學 2011



本文編號：3637562