蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb.）Trev.）又名千層塔,一種傳統(tǒng)的中草藥,其所含生物堿石杉堿甲（HuperzineA）對治療老年癡呆有很好效果,但蛇足石杉對生長環(huán)境要求較高,生長周期長,其長成成株需要6-15年,其野生資源比較匱乏。因此,不少科學(xué)家試圖通過化學(xué)合成HupA、組織培養(yǎng)蛇足石杉等方法來緩解HupA的市場需求,但是其化學(xué)合成工藝復(fù)雜且活性遠(yuǎn)不如天然產(chǎn)物,而且由于蛇足石杉生長環(huán)境及自身繁殖等特性使得組織培養(yǎng)技術(shù)也尚未成熟。目前,蛇足石杉野生資源是獲得HupA的主要來源。本試驗(yàn)主要從兩個(gè)方面對蛇足石杉進(jìn)行研究。一方面,通過對蛇足石杉進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序?qū)ふ襀upA代謝合成相關(guān)通路,挖掘與HupA代謝合成相關(guān)的功能基因。另一方面,通過SSR標(biāo)記技術(shù)分析蛇足石杉野生資源遺傳多樣性及群體遺傳結(jié)構(gòu),探究蛇足石杉進(jìn)化演變,為其合理保護(hù)、利用、開發(fā)策略的提出提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下:（1）構(gòu)建了蛇足石杉cDNA文庫。經(jīng)轉(zhuǎn)錄組測序及組裝獲得蛇足石杉unigene和contig分別為111,251和228,035條。通過功能注釋共有48989條unigenes獲得注釋信息,... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 蛇足石杉的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 蛇足石杉的形態(tài)特征
        1.1.2 蛇足石杉野生資源分布及生態(tài)環(huán)境
        1.1.3 蛇足石杉的藥用價(jià)值
        1.1.4 HupA化學(xué)合成及生物合成
        1.1.5 蛇足石杉的人工繁殖及栽培技術(shù)
        1.1.6 蛇足石杉的遺傳多樣性及進(jìn)化研究
        1.1.7 蛇足石杉功能基因及蛋白的生物信息
    1.2 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的應(yīng)用
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)在代謝網(wǎng)絡(luò)中的應(yīng)用
        1.2.2 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)在分子標(biāo)記開發(fā)中的應(yīng)用
    1.3 分子標(biāo)記的類型及特性
        1.3.1 顯性標(biāo)記
        1.3.2 共顯性標(biāo)記
    1.4 SSR標(biāo)記的開發(fā)
    1.5 SSR標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用
        1.5.1 SSR標(biāo)記技術(shù)在物種遺傳多樣性及分子育種研究中的應(yīng)用
        1.5.2 SSR標(biāo)記技術(shù)在種質(zhì)資源鑒定中的應(yīng)用
        1.5.3 SSR標(biāo)記技術(shù)在遺傳圖譜構(gòu)建中的應(yīng)用
    1.6 物種遺傳多樣性及群體遺傳結(jié)構(gòu)研究
    1.7 本研究的目的及意義
    總結(jié)
第二章 蛇足石杉轉(zhuǎn)錄組測序及生物堿代謝合成相關(guān)基因分析
    2.1 材料及方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.2 蛇足石杉轉(zhuǎn)錄組組裝結(jié)果統(tǒng)計(jì)
        2.2.3 Unigene功能注釋
        2.2.4 同源物種數(shù)據(jù)庫(NR databases)比對分析
        2.2.5 GO注釋和分類
        2.2.6 KEGG及KOG功能注釋及分類
        2.2.7 生物堿-石杉堿甲代謝合成相關(guān)通路
        2.2.8 石松類堿代謝合成相關(guān)基因預(yù)測
    2.3 分析與討論
        2.3.1 蛇足石杉序列組裝
        2.3.2 蛇足石杉基因功能注釋
        2.3.3 蛇足石杉生物堿合成相關(guān)功能基因
第三章 基于SSR標(biāo)記技術(shù)分析蛇足石杉遺傳多樣性及群體遺傳結(jié)構(gòu)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 蛇足石杉基因組DNA的檢測
        3.2.2 蛇足石杉SSR位點(diǎn)的開發(fā)
        3.2.3 PCR條件的優(yōu)化及SSR引物的初步篩選
        3.2.4 多態(tài)性引物的篩選
        3.2.5 毛細(xì)管電泳檢測
        3.2.6 蛇足石杉野生資源遺傳多樣性
        3.2.7 蛇足石杉種群分化
        3.2.8 蛇足石杉野生資源群體遺傳結(jié)構(gòu)
        3.2.9 HupA及HupB含量測定
    3.3 分析與討論
        3.3.1 蛇足石杉SSR位點(diǎn)的開發(fā)
        3.3.2 蛇足石杉SSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化及引物的篩選
        3.3.3 蛇足石杉多態(tài)性位點(diǎn)
        3.3.4 蛇足石杉遺傳多樣性評估
        3.3.5 蛇足石杉遺傳分化及群體遺傳結(jié)構(gòu)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果



本文編號：3515212