小麥（Triticum aestivum L.）是世界重要的糧食作物之一,其產(chǎn)量由畝穗數(shù)、穗粒數(shù)和千粒重決定,分枝（分蘗）是重要的農(nóng)藝性狀之一,分蘗數(shù)在一定程度上決定了最終的畝穗數(shù)并進(jìn)而影響單產(chǎn)。目前對小麥分蘗的研究大多集中在生理方面,對其發(fā)生的分子機(jī)理及調(diào)控方面的研究國內(nèi)外報(bào)道很少。已有研究表明在水稻（Oryza sativa L.）中MOC1作為正調(diào)控因子具有起始和促進(jìn)分蘗生長的功能。為理解小麥分蘗調(diào)控的分子機(jī)理,本研究分離了TaMOC1基因,并對其表達(dá)模式及功能進(jìn)行了初步探究,具體結(jié)果如下:TaMOC1基因具有三對等位基因,定位于7號A、B、D染色體上。三對等位基因之間的序列同源性高達(dá)97.71%,其cDNAs全長分別為1290bp（TaMOC1-7A）、1281bp（TaMOC1-7B）和1278bp（TaMOC1-7D）,分別編碼430、427和426個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。該基因gDNA僅含有1個(gè)外顯子。進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示TaMOC1-7B與大麥（Hordeum vulgare L.）中的LAS1具有較近的親緣關(guān)系,我們選取TaMOC1-7B為本研究的研究對象。瞬時(shí)表達(dá)實(shí)... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 植物側(cè)枝發(fā)育的基礎(chǔ)
        1.1.1 AM的起始(以擬南芥為例)
            1.1.1.1 AM起始的調(diào)控因子
            1.1.1.2 植物激素調(diào)控AM起始
        1.1.2 腋芽的生長調(diào)控
            1.1.2.1 調(diào)控腋芽生長的作用因子
            1.1.2.2 激素間的相互影響調(diào)控腋芽的生長
        1.1.3 其他作用因子影響側(cè)枝的形成
            1.3.1.1 光信號與基因間的相互影響調(diào)控側(cè)枝的發(fā)育
            1.1.3.2 糖調(diào)控側(cè)枝發(fā)育
    1.2 禾本科植物分蘗的影響因素(以小麥為例)
        1.2.1 品種
        1.2.2 環(huán)境溫度
        1.2.3 土壤水分
        1.2.4 土壤養(yǎng)分
        1.2.5 光照
        1.2.6 播種期
        1.2.7 播種密度和播種深度
    1.3 GRAS家族基因在植物中的研究進(jìn)展
        1.3.1 GRAS家族基因調(diào)控植物光信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.2 GRAS家族基因調(diào)控植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.3 GRAS家族基因調(diào)控植物的生長發(fā)育
            1.3.3.1 GRAS家族基因調(diào)控植物分生組織的發(fā)育
            1.3.3.2 GRAS家族基因調(diào)控根和莖的生長發(fā)育
        1.3.4 GRAS家族基因調(diào)控植物抵抗逆境脅迫過程
    1.4 大麥和小麥的分蘗突變體
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料及其種植條件
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要的酶及其它生化試劑、試劑盒
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 引物
        2.1.6 測序公司
        2.1.7 數(shù)據(jù)庫及分析軟件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 植物組織總RNA的提取(試劑盒法)
        2.2.2 CTAB法提取小麥葉片總DNA
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄cDNA第一條鏈的合成(試劑盒法)
        2.2.4 配制培養(yǎng)基(每100mL的配置方法)
        2.2.5 制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.6 制備根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.7 載體構(gòu)建
            2.2.7.1 PCR擴(kuò)增目的帶
            2.2.7.2 目的帶回收
            2.2.7.3 連接與轉(zhuǎn)化
            2.2.7.4 質(zhì)粒DNA的提取
            2.2.7.5 凍融法轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌細(xì)胞
        2.2.8 雙酶切反應(yīng)
        2.2.9 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的小麥幼胚的遺傳轉(zhuǎn)化
            2.2.9.1 RNAinterference(RNAi)及Overexpression(OX)表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.2.9.2 幼胚取材及共培養(yǎng)
            2.2.9.3 農(nóng)桿菌侵染小麥幼胚愈傷
            2.2.9.4 篩選劑篩選抗性愈傷
            2.2.9.5 抗性愈傷的分化
            2.2.9.6 抗性苗的壯苗
            2.2.9.7 抗性苗的春化及種植
            2.2.9.8 陽性苗的鑒定
        2.2.10 進(jìn)化樹分析
        2.2.11 亞細(xì)胞定位(原生質(zhì)體法)
            2.2.11.1 構(gòu)建35S::TaMOC1-GFP載體
            2.2.11.2 提取擬南芥葉片的原生質(zhì)體
            2.2.11.3 載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)化
            2.2.11.4 激光共聚焦顯微鏡對熒光信號的檢測
        2.2.12 轉(zhuǎn)基因小麥腋芽發(fā)育進(jìn)程的組織切片分析
            2.2.12.1 固定包埋材料
            2.2.12.2 切片及烘干
            2.2.12.3 脫蠟復(fù)水、苯胺藍(lán)染色及封片
            2.2.12.4 顯微鏡下觀察切片
        2.2.13 地高辛標(biāo)記的RNA原位雜交技術(shù)
            2.2.13.1 固定包埋組織材料(注意RNA操作)
            2.2.13.2 制備探針
            2.2.13.3 探針半定量
            2.2.13.4 組織材料切片及烘干
            2.2.13.5 脫蠟復(fù)水
            2.2.13.6 探針雜交
            2.2.13.7 雜交后處理
            2.2.13.8 顯微鏡觀察雜交信號
        2.2.14 TaMOC1-7A/7B/7D的分離
3 結(jié)果與分析
    3.1 TaMOC1的克隆
    3.2 TaMOC1蛋白定位于細(xì)胞核
    3.3 TaMOC1的表達(dá)模式分析
    3.4 TaMOC1的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.4.1 除草劑篩選
        3.4.2 PCR鑒定
    3.5 轉(zhuǎn)基因株系的表型分析
        3.5.1 TaMOC1-RNAi轉(zhuǎn)基因小麥的表型分析
        3.5.2 TaMOC1-RNAi轉(zhuǎn)基因小麥的腋芽發(fā)育
4 討論
    4.1 TaMOC1是水稻MOC1的同源基因
    4.2 TaMOC1基因與小麥分蘗密切相關(guān)
    4.3 TaMOC1基因的表達(dá)影響小麥的分蘗
    4.4 TaMOC1基因的表達(dá)可能影響小麥的小穗發(fā)育
    4.5 TaMOC1的遺傳轉(zhuǎn)化
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3447382