草木樨（Melilotus spp.）是重要的豆科牧草,但該草屬內(nèi)的進(jìn)化、種間關(guān)系和遺傳多樣性等分子水平的研究較少。在植物生長、發(fā)育和其他生物過程中,miRNA在轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)中起重要的調(diào)節(jié)作用。本文首次借助草木樨高通量測序數(shù)據(jù)開發(fā)EST-SSR分子標(biāo)記和研究該引物的通用性,并分析了草木樨屬18個種的遺傳多樣性和種群結(jié)構(gòu);此外,以香豆素含量差異的白花草木樨（M.albus）種質(zhì)為材料進(jìn)行高通量測序,鑒定miRNA以及miRNA差異表達(dá)分析。主要研究結(jié)果如下:1.利用草木樨EST序列設(shè)計得到了18182對SSR引物,根據(jù)堿基重復(fù)類型、預(yù)期片段大小和退火溫度等條件篩選出550對EST-SSR引物。在15份白花草木樨種質(zhì)中評價引物的多態(tài)性,共有114對引物表現(xiàn)出了較高的多態(tài)性,多態(tài)信息含量介于0.16⁰.92之間,平均值為0.79。進(jìn)一步研究新開發(fā)的114對EST-SSR引物在草木樨屬18個種的通用性,發(fā)現(xiàn)共有70對引物在18個種之間表現(xiàn)出較高的多態(tài)性,其通用率為61.4%�；赨PGMA聚類分析,草木樨屬18個種可分為三個集群,集群I、II和III分別包含了10、4... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

四個EST-SSR位點(diǎn)（引物21、31、61和392）在不同白花草木樨種質(zhì)中的電泳分析

18圖 2.2 15 份白花草木樨種質(zhì)基于 114 個 EST-SSR 標(biāo)記的聚類圖Figure 2.2 Dendrogram of 15 M. albus accessions based on 114 EST-SSR markers2.3.5 草木樨屬不同種 EST-SSR 引物的通用性分析以 18 個草木樨屬物種為研究對象，對新開發(fā)的具有高多態(tài)性的 114 對白花草木樨 EST-SSR 引物進(jìn)行引物轉(zhuǎn)移性的研究。結(jié)果表明，共有 70 對白花草木樨EST-SSR 引物能夠在草木樨屬 18 個種中通用，通用率為 61.4%（附表 2），并且具有明顯的多態(tài)性。由表 2.5 可以看出，具有多態(tài)性的 70 對白花草木樨 EST-SSR引物在草木樨屬 18 個種 54 個單株中共獲得了 411 個等位基因，每對 EST-SSR引物產(chǎn)生 2-11（平均值為 5.87）個等位基因。此外，這 70 個白花草木樨 EST-SSR位點(diǎn)的觀測雜合度 HO、期望雜合度 HE和多態(tài)信息含量 PIC 的范圍分別為 0~1、0.10~0.88 和 0.10~0.87，其平均值分別為 0.11、0.72 和 0.69（表 2.5）。以上結(jié)果證明基于白花草木樨 EST 序列數(shù)據(jù)開發(fā)的 SSR 引物具有很好的通用性，可用于

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 草木樨屬 EST-SSR 遺傳多樣性分析及 miRNA 的鑒定續(xù)表 2.6 利用 70 個 EST-SSR 標(biāo)記檢測草木樨屬 18 個種的遺傳多樣性信息Continue table 2.6 Genetic diversity of 18 Melilotus species detected by 70 EST-SSR markers種Species多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)The numberofpolymorphicloci多態(tài)性位點(diǎn)百分比（%）Thepercentage ofpolymorphicloci (%)觀測等位基因數(shù)Observednumberof alleles有效等位基因數(shù)Effectivenumberof allelesNei 基因多樣性Nei's(1973)genediversityShannon 信息指數(shù)Shannon'sInformationindexM. speciosus15 3.65% 1.037 1.026 0.015 0.021M. spicatus113 27.49% 1.275 1.166 0.100 0.150M. suaveolens34 8.27% 1.083 1.058 0.033 0.048M. sulcatus1 0.24% 1.002 1.002 0.001 0.002M. tauricus40 9.73% 1.097 1.069 0.039 0.057M. wolgicus18 4.38% 1.044 1.030 0.017 0.025

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于系譜和SSR標(biāo)記的高山杜鵑雜交種親緣關(guān)系分析[J]. 張露,王繼華,解瑋佳,蔡艷飛,宋杰,彭綠春,李樹發(fā),李世峰.  西北植物學(xué)報. 2016(12)
[2]利用EST-SSR通用性和EST數(shù)據(jù)庫篩選三葉草EST-SSR分子標(biāo)記[J]. 高雪,王秀華,石香雪,李家麗,趙巖.  中國草地學(xué)報. 2016(06)
[3]飼肥兼用草木樨栽培技術(shù)要點(diǎn)及利用方式[J]. 唐紅琴,李忠義,何鐵光,蒙炎成,王瑾.  中國園藝文摘. 2016(08)
[4]植物MicroRNA研究進(jìn)展[J]. 鄭海澤,張紅芳.  山西林業(yè)科技. 2015(03)
[5]優(yōu)質(zhì)牧草、綠肥草木樨的研究進(jìn)展[J]. 景春梅,劉慧,席琳喬,馬春暉.  草業(yè)科學(xué). 2014(12)
[6]19份草木樨種質(zhì)農(nóng)藝學(xué)與品質(zhì)性狀初步評價[J]. 駱凱,狄紅艷,張吉宇,王彥榮,李治錢.  草業(yè)科學(xué). 2014(11)
[7]大豆種質(zhì)對花葉病毒病和疫霉根腐病抗病性的SSR標(biāo)記輔助鑒定[J]. 韓英鵬,趙雪,李修平,滕衛(wèi)麗,李文濱.  大豆科學(xué). 2014(01)
[8]基于ITS和trnL-trnF序列的草木樨種群遺傳多樣性研究[J]. 狄紅艷,駱凱,張吉宇,段珍,霍雅馨,王彥榮.  西北植物學(xué)報. 2014(02)
[9]俄羅斯黃花草木樨開發(fā)與利用研究[J]. 林年豐,劉巖巖,湯潔,卞建民,李昭陽,梁爽.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(01)
[10]新疆冬小麥套種草木樨效益淺析[J]. 席琳喬,劉慧,馬春暉.  草食家畜. 2013(06)

博士論文
[1]基于cpDNA單倍型和SSR分析的銀杏群體遺傳結(jié)構(gòu)和譜系地理學(xué)研究[D]. 閆小玲.浙江大學(xué) 2010

碩士論文
[1]草木樨屬植物形態(tài)學(xué)和分子系統(tǒng)進(jìn)化研究[D]. 狄紅艷.蘭州大學(xué) 2015
[2]偃麥草和中間偃麥草抗旱鑒定及其分子標(biāo)記輔助篩選[D]. 李雪蓮.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3446812