枸杞（Lycium）為茄科植物,西北地區(qū)常見(jiàn)的枸杞有三種:寧夏枸杞（Lycium barbarum vr）、黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）、北方枸杞（Lycium chinense Mill.vr）。其中,黑果枸杞因其花青素含量豐富,寧夏枸杞因其多糖含量高保健效果好深受人們的喜愛(ài)。然而,隨著黑果枸杞野生資源急劇降低以及人們對(duì)寧夏枸杞保健價(jià)值要求的提高,枸杞細(xì)胞工程研究的開(kāi)展成為一件有重要意義的事情。本研究以青藏高原地區(qū)的野生黑果枸杞及人工栽培的寧夏枸杞為材料,在建立起組織培養(yǎng)再生體系的基礎(chǔ)上,對(duì)其進(jìn)行原生質(zhì)體的游離與培養(yǎng)研究,為后續(xù)黑果枸杞和寧夏枸杞的體細(xì)胞雜交研究提供技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下:1.以黑果枸杞的無(wú)菌苗葉片為外植體,建立了兩條器官再生途徑:一條是經(jīng)愈傷組織再分化的間接再生體系,一條是不經(jīng)愈傷組織再分化的直接再生體系。最佳愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.5 mg·L^-1 2,4-D,誘導(dǎo)率達(dá)100%;最佳分化培養(yǎng)基為MS+1.5 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 IBA... 

【文章來(lái)源】：青海大學(xué)青海省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

黑果枸杞的組織培養(yǎng)與離體再生EFG

252.2.2.2寧夏枸杞再生體系的建立同黑果枸杞愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果類似，6-BA的添加同樣不利于寧夏枸杞愈傷組織的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)，單獨(dú)添加0.5~1.5mg·L-1的2,4-D可以誘導(dǎo)出長(zhǎng)勢(shì)較好的黃綠色、質(zhì)地松軟的愈傷組織（圖2.2A）。綜合誘導(dǎo)率及愈傷組織的生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)（表2.5），最佳愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為添加了0.5mg·L-12,4-D的一組，誘導(dǎo)率為83.3%。當(dāng)誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基加入6-BA時(shí)，外植體僅表現(xiàn)為邊緣稍有膨脹，大部分表現(xiàn)出干黃狀態(tài)，沒(méi)有愈傷組織產(chǎn)生。圖2.2寧夏枸杞的組織培養(yǎng)與離體再生注：A:由葉片外植體誘導(dǎo)的愈傷組織B:繼代培養(yǎng)的愈傷組織C:愈傷組織分化出的不定芽D-E:葉片分化出的不定芽F:不定芽誘導(dǎo)生根G:移栽成活寧夏枸杞再生苗ABCDEFG

32處于快速生長(zhǎng)期（18-27d）的愈傷組織細(xì)胞分裂旺盛，呈黃綠色，質(zhì)地松軟。（圖2.2B），選擇該時(shí)期的愈傷組織當(dāng)做材料來(lái)源進(jìn)行游離研究，效果更好。圖2.4寧夏枸杞愈傷組織的生長(zhǎng)曲線Figure2.4GrowthcurveofLyciumbarbarumcallus2.3討論2.3.1植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)分化和脫分化的影響以枸杞葉片為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，多數(shù)報(bào)導(dǎo)都是通過(guò)間接器官發(fā)生途徑來(lái)建立再生體系，再生周期通常在三個(gè)月以上[114-115]。本研究通過(guò)對(duì)添加不同濃度6-BA和NAA的結(jié)果研究，完善并優(yōu)化了枸杞葉片的直接再生方法，減少了愈傷誘導(dǎo)步驟，將枸杞的再生周期縮短到兩個(gè)月左右，是一種更加快捷高效的再生體系。研究發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)添加6-BA即可誘導(dǎo)不定芽的形成，且隨著6-BA濃度的升高，不定芽的誘導(dǎo)率和平均芽數(shù)降低，不定芽的長(zhǎng)勢(shì)也越來(lái)越差，黑果枸杞和寧夏枸杞的葉片分化均有這種現(xiàn)象出現(xiàn)。類似的結(jié)果也存在于刨花潤(rùn)楠（MachiluspauhoiKanehira）[116]和海倫兜蘭（PaphiopedilumhelenaeAver.）[117]不定芽的誘導(dǎo)中。往含有6-BA的培養(yǎng)基中添加一定量的NAA可以提高枸杞葉片產(chǎn)生的不定芽數(shù)，這一現(xiàn)象與Prakash和Staden[118]在研究Searsiadentata的再生時(shí)得出的結(jié)果相吻合。NAA與6-BA的組合有利于芽形態(tài)的建成，可促進(jìn)芽

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山丹原生質(zhì)體的分離條件探究[J]. 王珺華,王凱琪,王凱,孫志宏,曹園,齊向英.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2019(34)
[2]酸棗花粉原生質(zhì)體的分離條件研究[J]. 牛瑜菲,彭建營(yíng).  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2019(32)
[3]甘薯愈傷組織的形成及其影響因素研究進(jìn)展[J]. 呂曉龍,孫潔,王希卓,王彩霞,周新群,陳琳.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(20)
[4]植物細(xì)胞全能性和再生[J]. 許智宏,張憲省,蘇英華,胡玉欣,徐麟,王佳偉.  中國(guó)科學(xué):生命科學(xué). 2019(10)
[5]鋪地刺蒴麻的不定芽誘導(dǎo)和植株再生[J]. 陳雙艷,于昕塍,熊玉萍,吳坤林,鄭楓,簡(jiǎn)曙光,任海,曾宋君,馬國(guó)華.  植物生理學(xué)報(bào). 2019(10)
[6]輪鐘花組織培養(yǎng)的最佳外植體及培養(yǎng)基篩選[J]. 祝久潔,吳漢竹,孫慶文,郭文凱,徐文芬.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(10)
[7]基于SSR和SRAP標(biāo)記的紅花玉蘭品種遺傳關(guān)系分析及分子鑒定[J]. 張妹,何正權(quán),馬江,桑子陽(yáng),朱仲龍,張德春,馬履一,陳發(fā)菊.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(09)
[8]刺梨葉片愈傷組織培養(yǎng)體系建立及其主要活性物質(zhì)分析[J]. 房洪舟,魯敏,安華明.  植物生理學(xué)報(bào). 2019(08)
[9]直干桉超級(jí)苗組培快繁技術(shù)體系研究[J]. 王曉麗,孫繼瑞,韋文長(zhǎng),李賢忠,曹子林.  西北林學(xué)院學(xué)報(bào). 2019(04)
[10]大苞白山茶胚性愈傷的誘導(dǎo)及植株再生[J]. 陳朋,楊蕾蕾,張?zhí)K州,張壽洲,楊建芬.  植物生理學(xué)報(bào). 2019(06)

博士論文
[1]青楊懸浮細(xì)胞系建立與原生質(zhì)體培養(yǎng)研究[D]. 黃振.北京林業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]狹葉黃芩再生體系建立及茉莉酸甲酯對(duì)其抗旱影響的研究[D]. 牛喆.東北林業(yè)大學(xué) 2019
[2]樟樹(shù)胚萌發(fā)、體胚發(fā)生及再生植株體系研究[D]. 楊柳.中南林業(yè)科技大學(xué) 2019
[3]紅陽(yáng)獼猴桃原生質(zhì)體培養(yǎng)及影響其生長(zhǎng)分裂的理化因子分析[D]. 王明明.西南大學(xué) 2019
[4]紅松體胚成熟培養(yǎng)與胚性愈傷組織保存研究[D]. 彭春雪.東北林業(yè)大學(xué) 2019
[5]貴州主栽草莓品種的離體快繁技術(shù)及組培苗的遺傳變異[D]. 苗徐靜.貴州大學(xué) 2018
[6]葡萄胚性懸浮系建立及原生質(zhì)體分離研究[D]. 范琪.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[7]花椒原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)[D]. 李南.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[8]甘蔗原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)體系的建立和優(yōu)化[D]. 史曉朋.廣西大學(xué) 2017
[9]廣藿香原生質(zhì)體融合與茉莉酸甲酯參與調(diào)控的百秋李醇生物合成機(jī)制初步研究[D]. 李磊.廣東藥科大學(xué) 2017
[10]西洋參花藥及原生質(zhì)體培養(yǎng)研究[D]. 尹紅新.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015



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