甘薯（Ipomoea batatas）是世界上重要的糧食、飼料、蔬菜、工業(yè)原料和新型能源作物。提高甘薯產(chǎn)量已成為當(dāng)前甘薯育種的主要方向之一。MADS-box蛋白是一類重要的轉(zhuǎn)錄因子,在植物生長(zhǎng)發(fā)育及抗逆等過程發(fā)揮著重要功能。我們利用轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)及甘薯近緣野生種I.trifida全基因組數(shù)據(jù)在甘薯（Xu22）中篩選并克隆到8個(gè)MADS-box基因;利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對(duì)其在甘薯各組織的表達(dá)特性進(jìn)行了分析;對(duì)甘薯幼苗進(jìn)行了非生物脅迫和激素處理,利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR分析了8個(gè)MADS-box基因?qū)Ψ巧锩{迫和激素的響應(yīng),篩選到一個(gè)可能與甘薯塊根發(fā)育和抗逆相關(guān)的MADS-box基因Ib MBP4,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法在番茄中異源超表達(dá)了該基因,初步分析了Ib MBP4的功能。主要研究結(jié)果如下:（1）通過轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)及I.trifida全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選到8個(gè)MADS-box基因,以甘薯栽培種徐薯22葉、莖、根混合c DNA為模板,克隆了8個(gè)MADS-box基因。（2）通過生物信息學(xué)分析了8個(gè)MADS-box蛋白的基本理化性質(zhì)。對(duì)各MADS-box基因進(jìn)行了亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)這8個(gè)基因都定位于... 

【文章來源】：江蘇師范大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：127 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

甘薯各組織總RNA電泳圖

江蘇師范大學(xué)碩士學(xué)位論文20表2-4各組織RNA的濃度測(cè)定Table2-4DeterminationoftheconcentrationofRNAsineachtissue材料名稱（中文）英文縮寫濃度（ng/μL）260/280葉L937.81.99莖S541.61.84纖維根FR640.31.88發(fā)育根1DR1322.11.89發(fā)育根2DR2307.41.86成熟根MR370.11.92從以上結(jié)果我們可以看出，所提取RNA的質(zhì)量良好，28S和18S條帶較亮，5s條帶明顯，且亮度較弱，并且濃度較高，可用于后續(xù)反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)。2.3.2MADS-box基因的擴(kuò)增根據(jù)已有的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，結(jié)合公布的I.trifida全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)，應(yīng)用引物設(shè)計(jì)軟件PrimerPremier5，設(shè)計(jì)得到8對(duì)MADS-box引物，以之前反轉(zhuǎn)錄所得徐22各組織（葉、莖、纖維根、發(fā)育根初期、發(fā)育根后期和成熟塊根）混合cDNA為模板，分別對(duì)8個(gè)MADS-box基因進(jìn)行了克攏如圖2-2、2-3和2-4所示，所擴(kuò)增條帶大小與理論片段長(zhǎng)度一致（IbMBP1：450bp，IbMBP2：666bp，IbMBP4：1036bp，IbMBP5：774bp，IbMBP6：648bp，IbMBP7：696bp，IbMBP8：636bp，IbMBP10：597bp），可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖2-2MADS-box基因PCR電泳圖Figure2-2ThePCRelectrophoresisofMADS-boxgenesM:DL2000Marker，1：IbMBP1，2：IbMBP2，3：IbMBP6，4：IbMBP7，5：IbMBP8，6：IbMBP10M:DL2000Marker,1:IbMBP1,2:IbMBP2,3:IbMBP6,4:IbMBP7,5:IbMBP8,6:IbMBP10

第二章甘薯MADS-box基因的篩選及克隆21圖2-3IbMBP4基因PCR電泳圖Figure2-3ThePCRelectrophoresisofIbMBP4geneM:DL2000Marker，1~5：IbMBP4基因M:DL2000Marker,1~5:IbMBP4gene圖2-4IbMBP5基因PCR電泳圖Figure2-4ThePCRelectrophoresisofIbMBP5geneM:DL2000Marker，1：IbMBP5基因M:DL2000Marker,1:IbMBP5gene2.3.3陽(yáng)性單克隆的篩選將PCR所得條帶經(jīng)過純化加A尾后，與克隆載體pMD19-T連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞后，利用菌落PCR對(duì)長(zhǎng)出的單菌落進(jìn)行陽(yáng)性鑒定。如圖2-5至2-11所示，篩選獲得7個(gè)IbMBP1陽(yáng)性克壟7個(gè)IbMBP2陽(yáng)性克壟10個(gè)IbMBP4陽(yáng)性克壟8個(gè)IbMBP5陽(yáng)性克壟3個(gè)IbMBP6陽(yáng)性克壟6個(gè)IbMBP7陽(yáng)性克壟7個(gè)IbMBP8陽(yáng)性克隆和8個(gè)IbMBP10陽(yáng)性克攏圖2-5IbMBP1基因菌落PCRFigure2-5ThebacteriaPCRofIbMBP1geneM:DL2000Marker，1~7：七個(gè)IbMBP1陽(yáng)性克隆M:DL2000Marker,1~7:sevenIbMBP1positiveclones

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]番茄SlMADS23-like基因的克隆及功能研究[D]. 封葉.重慶大學(xué) 2016
[2]外源ABA和ZT對(duì)小麥穗花發(fā)育調(diào)控效應(yīng)的研究[D]. 戴曉琴.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2002
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本文編號(hào)：3374277