轉(zhuǎn)Bt抗蟲棉是我國(guó)種植面積最大的轉(zhuǎn)基因作物,在我國(guó)已有20年種植歷史。外源基因表達(dá)穩(wěn)定性一直是轉(zhuǎn)基因遺傳分析和分子特征評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容,為了深入研究轉(zhuǎn)Bt抗蟲棉外源基因表達(dá)穩(wěn)定性,本研究以保鈴棉中的MON531轉(zhuǎn)化體（MON531）、7S非功能插入（簡(jiǎn)稱7S）,以及與MON531相同載體的MON757轉(zhuǎn)化體（MON757）為研究材料,分析了單個(gè)轉(zhuǎn)化體插入和復(fù)合轉(zhuǎn)化體插入在外源殺蟲蛋白表達(dá)、mRNA轉(zhuǎn)錄和啟動(dòng)子甲基化水平上的差異,主要研究結(jié)果如下:1.以棉花基因組與插入序列的連接區(qū)為靶標(biāo),建立7S的定性、定量PCR檢測(cè)方法。利用建立的方法分析了2014年我國(guó)湖北省市售的48份轉(zhuǎn)基因棉花種子,有8份檢測(cè)到7S非功能插入,定量PCR檢測(cè)表明,其含量介于0.46%-34.39%。進(jìn)一步跟蹤檢測(cè)表明,保鈴棉531中7S非功能插入與抗蟲功能性插入在遺傳上不連鎖。2.利用ELISA方法測(cè)定MON531、MON757、7S及其復(fù)合轉(zhuǎn)化體Cry1Ac蛋白表達(dá)情況。對(duì)3個(gè)市場(chǎng)棉種材料研究表明,7S非功能插入不影響MON531中Cry1Ac蛋白表達(dá);對(duì)具有相同遺傳背景的純合MON531、MON757及其復(fù)合轉(zhuǎn)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

引物、探針設(shè)計(jì)圖

.2 我國(guó)棉花種子中 7S 非功能插入的定性檢測(cè)分析運(yùn)用 7S 非功能插入定性 PCR 檢測(cè)方法對(duì) 2014 年湖北省種子市場(chǎng)購(gòu)買的鄂雜棉品種進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明湘沃棉 C35F1、湘雜棉 13 號(hào) F1、渝雜 2 號(hào) F1、鉬雜F1、創(chuàng)雜棉 21 號(hào)、鄂雜棉 26 號(hào) F1 等 7 個(gè)材料檢測(cè)到 7S 非功能插入序列。隨機(jī) S-26F1、創(chuàng)雜棉 21 號(hào))，分別對(duì)其 60 單粒進(jìn)行鑒定，兩轉(zhuǎn)基因棉花品種各檢出 7S 非功能插入的種子（圖 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112圖 2-3. 7S 非功能插入定性 PCRA: 100% B: 10% C:1% DE: 0.05% F: 0% M: DL2000 Figure 2-3. Sensitivity test of qualA: 100% B:10% C:1% E: 0.05% F: 0% M: DL2000 圖 2-2. 定性 PCR 特異性測(cè)定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 陽(yáng)性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker

2.2.2 我國(guó)棉花種子中 7S 非功能插入的定性檢測(cè)分析運(yùn)用 7S 非功能插入定性 PCR 檢測(cè)方法對(duì) 2014 年湖北省種子市場(chǎng)購(gòu)買的鄂雜棉 26 號(hào) F148 個(gè)品種進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明湘沃棉 C35F1、湘雜棉 13 號(hào) F1、渝雜 2 號(hào) F1、鉬雜 411F1、S-26F1、創(chuàng)雜棉 21 號(hào)、鄂雜棉 26 號(hào) F1 等 7 個(gè)材料檢測(cè)到 7S 非功能插入序列。隨機(jī)抽取兩個(gè)種(湘 S-26F1、創(chuàng)雜棉 21 號(hào))，分別對(duì)其 60 單粒進(jìn)行鑒定，兩轉(zhuǎn)基因棉花品種各檢出 1 粒和 2含有 7S 非功能插入的種子（圖 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112圖 2-3. 7S 非功能插入定性 PCR 靈敏度測(cè)試A: 100% B: 10% C:1% D: 0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 MarkerFigure 2-3. Sensitivity test of qualitative PCRA: 100% B:10% C:1% D:0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 Marker圖 2-2. 定性 PCR 特異性測(cè)定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 陽(yáng)性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]轉(zhuǎn)基因棉花MON757轉(zhuǎn)化體的檢測(cè)和外源基因表達(dá)的初步分析[D]. 楊陽(yáng).中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
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本文編號(hào)：3311788