喜樹（Camptotheca acuminata）是中國一種獨特的樹種。通過組織培養(yǎng),特別是通過遺傳轉(zhuǎn)化和基因工程的手段,對提高該藥用植物的喜樹堿含量具有重要意義。本實驗以喜樹的幼嫩葉片和莖段為材料,探討MS、WPM基本培養(yǎng)基和不同激素（2,4-D、IBA、6-BA、IAA）配比對愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的影響,并篩選喜樹細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的最佳培養(yǎng)基配方。利用喜樹愈傷組織構(gòu)建懸浮細(xì)胞體系,并應(yīng)用不同濃度SA進行不同時長的處理檢測懸浮細(xì)胞中喜樹關(guān)鍵酶基因表達量。初步建立通過根癌農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)的喜樹水楊酸轉(zhuǎn)運基因CaSAT基因的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),結(jié)果表明:1.喜樹幼嫩葉片外植體誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)以WPM+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.6 mg/L+蔗糖30 g/L,pH 5.8為最優(yōu)。繼代培養(yǎng)以MS+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.6mg/L為最適。2.通過對喜樹誘導(dǎo)愈傷組織,成功建立了喜樹愈傷組織懸浮細(xì)胞的體系,并對培養(yǎng)基進行了改良,確定喜樹愈傷組織懸浮細(xì)胞培養(yǎng)基為MS+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.6mg/L+IAA 0.25 mg/L+蔗糖3... 

【文章來源】：大連工業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 喜樹
        1.1.1 喜樹簡介
        1.1.2 喜樹的應(yīng)用價值
        1.1.3 研究進展
        1.1.4 喜樹堿及其應(yīng)用價值
        1.1.5 喜樹堿代謝途徑
    1.2 組織培養(yǎng)及其影響因素
        1.2.1 組織培養(yǎng)定義
        1.2.2 實現(xiàn)植物再生的途徑
        1.2.3 影響因素
    1.3 水楊酸與水楊酸轉(zhuǎn)運蛋白
        1.3.1 水楊酸及其生理意義
        1.3.2 水楊酸與植物的次生代謝
        1.3.3 轉(zhuǎn)運蛋白
        1.3.4 水楊酸轉(zhuǎn)運基因的發(fā)現(xiàn)和功能
    1.4 喜樹的懸浮培養(yǎng)
    1.5 愈傷組織的誘導(dǎo)與分化
    1.6 木本植物遺傳轉(zhuǎn)化
        1.6.1 木本植物遺傳轉(zhuǎn)化特點
        1.6.2 影響木本植物遺傳轉(zhuǎn)化的因素
        1.6.3 木本植物轉(zhuǎn)化系統(tǒng)及方法
        1.6.4 增加喜樹中喜樹堿含量的代謝工程
        1.6.5 SAT基因的遺傳轉(zhuǎn)化
    1.7 本實驗的目的與意義
第二章 喜樹再生體系的構(gòu)建
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 激素的配制
        2.2.2 培養(yǎng)基的配制
        2.2.3 喜樹的組織培養(yǎng)方法
        2.2.4 培養(yǎng)基的改良
        2.2.5 無菌苗的煉苗移栽
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 外植體消毒
        2.3.2 組培苗的生根誘導(dǎo)
        2.3.3 組培苗的芽苗增殖誘導(dǎo)
        2.3.4 培養(yǎng)基的改良
        2.3.5 無菌苗的煉苗移栽
    2.4 小結(jié)
第三章 水楊酸在喜樹懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中的作用
    3.1 實驗材料與儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 培養(yǎng)基
        3.2.2 喜樹愈傷組織的誘導(dǎo)
        3.2.3 喜樹懸浮細(xì)胞體系的構(gòu)建
        3.2.4 細(xì)胞再生能力的鑒定
        3.2.5 培養(yǎng)基的改良
        3.2.6 HPLC法檢測喜樹堿含量
        3.2.7 q-RTPCR檢測SA對喜樹懸浮細(xì)胞關(guān)鍵酶基因表達量的影響
        3.2.8 喜樹懸浮細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.9 實時熒光定量PCR檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 兩種不同培養(yǎng)基上喜樹愈傷的誘導(dǎo)對比
        3.3.2 喜樹愈傷懸浮細(xì)胞體系的構(gòu)建
        3.3.3 液相檢測喜樹不同部位CPT含量
        3.3.4 喜樹懸浮細(xì)胞RNA的提取
        3.3.5 q-RT-PCR檢測SA對喜樹懸浮細(xì)胞基因表達量的影響
    3.4 小結(jié)
第四章 轉(zhuǎn)CASAT喜樹的初步構(gòu)建
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 材料
        4.1.2 菌種
        4.1.3 試劑
        4.1.4 儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 試劑的處理
        4.2.2 培養(yǎng)基
        4.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)條件
        4.2.4 農(nóng)桿菌的培養(yǎng)
        4.2.5 預(yù)培養(yǎng)
        4.2.6 侵染
        4.2.7 脫菌(外植體清洗辦法)
        4.2.8 誘導(dǎo)抗性愈傷組織
        4.2.9 抗性愈傷組織的篩選
        4.2.10 生根培養(yǎng)
        4.2.11 芽苗增殖與壯苗培養(yǎng)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 外植體的預(yù)培養(yǎng)
        4.3.2 外植體的侵染
        4.3.3 侵染后外植體的脫菌
        4.3.4 抗性愈傷組織的誘導(dǎo)及篩選
        4.3.5 抗性愈傷組織的生根分化
        4.3.6 抗性愈傷的芽苗增殖分化
    4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]喜樹高效再生體系的建立與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 楊國崢.貴州大學(xué) 2007
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本文編號：3184702