氮是植物組織和器官的重要組成成分,在植物的生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。硝態(tài)氮為大多數(shù)植物主要的氮源,植物對NO₃^-的吸收與轉運是通過硝態(tài)氮轉運蛋白來完成的。NRT1.1、NRT1.2和NRT 1.7是NRT基因家族的重要成員,它們不僅參與植物對氮的吸收、轉運和再利用過程,還在植物對干旱等逆境響應過程中發(fā)揮重要作用。羊草為我國北方草原的重要物種之一,因其長期生活在干旱、寒冷、貧瘠環(huán)境下,蘊含豐富的耐貧瘠、抗逆基因資源。因此從羊草中克隆上述基因,不僅為揭示羊草氮吸收、轉運的分子調控機理提供基礎,還將對培育氮高效利用和抗逆植物提供重要支持。本試驗以羊草吉生四號為材料,利用前期已獲得的轉錄組測序數(shù)據(jù),通過RT-PCR方法獲得羊草LcNRT 1.1、LcNRT 1.2和LcNRT 1.7三個基因的cDNA全長序列。然后利用生物信息學相關軟件對LcNRT1.1、LcNRT1.2和LcNRT1.7進行分析,預測各基因編碼蛋白的基本結構、親疏水性和跨膜結構域;研究分析了羊草LcNRT 1.1、LcNRT 1.2和LcNRT 1.7在羊草不同組織間、不同生長時... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 植物氮素同化概述
        1.1.1 氮素植物生長發(fā)育中的主要作用
        1.1.2 高等植物同化氮素的生理機制
        1.1.3 高等植物吸收氮素的分子機制
    1.2 高等植物硝態(tài)氮轉運蛋白研究進展
        1.2.1 硝態(tài)氮轉運蛋白家族研究進展
        1.2.2 硝態(tài)氮轉運蛋白結構功能研究進展
    1.3 氮素對羊草生長發(fā)育研究進展
        1.3.1 施氮對羊草光合作用的影響
        1.3.2 氮素對羊草營養(yǎng)生長的影響
        1.3.3 氮素對羊草生殖生長的影響
        1.3.4 氮肥對羊草品質的影響
    1.4 研究目的與意義
    1.5 研究內(nèi)容
第二章 LcNRT1.1， LcNRT1.2， LcNRT1.7 全長擴增與生物信息學分析
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 實驗藥品
        2.1.4 實驗儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 植物預處理
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 c DNA第一鏈的合成
        2.2.4 羊草LcNRT1.1， LcNRT1.2， LcNRT1.7 基因克隆
        2.2.5 PCR產(chǎn)物回收純化與質粒提取
        2.2.6 目的片段與載體的連接
        2.2.7 連接產(chǎn)物的轉化
        2.2.8 菌落PCR檢測
        2.2.9 基因生物信息學分析
    2.3 結果分析與討論
        2.3.1 總RNA提取與反轉錄檢測
        2.3.2 羊草NRT基因c DNA全長
        2.3.3 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 核苷酸序列分析
        2.3.4 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 親、疏水性預測
        2.3.5 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 二級結構預測
        2.3.6 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 跨膜區(qū)預測
        2.3.7 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 亞細胞定位預測
        2.3.8 LcNRT1.1、LcNRT1.2、LcNRT1.7 編碼蛋白質序列同源性分析
        2.3.9 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 系統(tǒng)進化樹的構建
        2.3.10 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 三級蛋白結構預測
    2.4 小結
第三章 羊草Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 的表達特性分析
    3.1 羊草不同生長時期Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達變化
        3.1.1 材料
        3.1.2 實時熒光定量
        3.1.3 基因的普通PCR擴增
        3.1.4 基因的熒光定量PCR分析
    3.2 晝夜節(jié)律對Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達的影響
        3.2.1 材料
        3.2.2 實時熒光定量
    3.3 不同形態(tài)氮素梯度對Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達的影響
        3.3.1 材料
        3.3.2 實時熒光定量
    3.4 不同氮素配比處理對Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達的影響
        3.4.1 材料
        3.4.2 實時熒光定量
    3.5 等銨減硝及等硝增銨對Lc NRT1.1、Lc NRT1.2、Lc NRT1.7 表達的影響
        3.5.1 材料
        3.5.2 實時熒光定量
    3.6 結果與分析
        3.6.1 羊草不同生長時期Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達特性
        3.6.2 晝夜節(jié)律對Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達的影響
        3.6.3 不同形態(tài)氮素梯度對羊草根系中Lc NRT1.1 和Lc NRT1.7 表達的影響
        3.6.4 不同銨硝配比處理對羊草根系中Lc NRT1.1 和Lc NRT1.7 表達的影響
        3.6.5 等銨減硝對羊草根系中 LcNRT1.1 和 LcNRT1.7 表達的影響
        3.6.6 等硝增銨對羊草根系中Lc NRT1.1 和Lc NRT1.7 表達的影響
    3.7 討論
    3.8 小結
第四章 全文結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[4]人工羊草地水肥效應研究[D]. 蘇富源.西北農(nóng)林科技大學 2016
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本文編號：3161267