甘蔗是我國(guó)最主要的糖料作物,在促進(jìn)我國(guó)蔗區(qū)農(nóng)民增加收入和擴(kuò)大就業(yè)方面發(fā)揮著重要作用。廣西是中國(guó)最大的制糖省,甘蔗種植面積大,病害發(fā)生種類多,為害嚴(yán)重�；兽r(nóng)藥的大量使用在一定程度上發(fā)揮了重要的作用,但過(guò)量施用導(dǎo)致的生產(chǎn)成本攀升及環(huán)境污染問(wèn)題日趨嚴(yán)重,生物菌肥的開(kāi)發(fā)利用為實(shí)現(xiàn)甘蔗綠色生產(chǎn)、提質(zhì)增效提供了重要的保障。本研究通過(guò)對(duì)甘蔗根內(nèi)生芽孢桿菌進(jìn)行分離鑒定,揭示了芽孢桿菌在甘蔗中的種群分布情況,為甘蔗內(nèi)生芽孢桿菌資源庫(kù)的構(gòu)建提供了理論依據(jù)。主要研究成果如下:1.通過(guò)16S rRNA基因測(cè)序,從甘蔗根中共分離鑒定了20株芽孢桿菌,并利用Rep-PCR技術(shù)證明甘蔗內(nèi)生芽孢桿菌具有豐富的表型和遺傳多樣性。2.芽孢桿菌的促生（PGP）特性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,13株（65%）芽孢桿菌能產(chǎn)生IAA,其分泌的IAA產(chǎn)量在11.38-35.74μg.m L^-1之間,產(chǎn)量最高的是Bacillus velezensis Y8;10株（50%）芽孢桿菌能溶解無(wú)機(jī)磷;5株（25%）芽孢桿菌具有分泌嗜鐵素的能力。3.使用8種病原真菌進(jìn)行拮抗實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有芽孢桿菌都至少對(duì)1種病原真菌有抗性,Ba... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 植物根際促生菌（PGPR）
    1.2 芽孢桿菌在國(guó)內(nèi)外的應(yīng)用情況
    1.3 芽孢桿菌促生及生防作用機(jī)制
        1.3.1 芽孢桿菌的促生作用機(jī)制
        1.3.2 芽孢桿菌的生防作用機(jī)制
    1.4 芽孢桿菌在甘蔗中的應(yīng)用
    1.5 研究?jī)?nèi)容
    1.6 研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 甘蔗內(nèi)生芽孢桿菌的分離純化
        2.1.1 分離樣品的采集
        2.1.2 甘蔗內(nèi)生細(xì)菌的分離純化
        2.1.3 促生（PGP）能力檢測(cè)主要培養(yǎng)基及試劑
        2.1.4 分泌IAA能力檢測(cè)
        2.1.5 嗜鐵能力檢測(cè)
        2.1.6 磷酸鹽溶解能力測(cè)定
        2.1.7 16SrRNA基因序列的擴(kuò)增與系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建
    2.2 芽孢桿菌抗真菌活性檢測(cè)及次生代謝基因篩選
        2.2.1 芽孢桿菌抗病原真菌檢測(cè)
        2.2.2 芽孢桿菌DNA提取
        2.2.3 次生代謝合成酶基因的篩選
    2.3 芽孢桿菌屬指紋圖譜分析
        2.3.1 芽孢桿菌基因組DNA提取
        2.3.2 Rep-PCR擴(kuò)增反應(yīng)
        2.3.3 Rep-PCR聚類分析
    2.4 Bacillus velezensis Y8 發(fā)酵條件優(yōu)化及抗菌物質(zhì)提取
        2.4.1 供試培養(yǎng)基及菌株
        2.4.2 種子菌培養(yǎng)
        2.4.3 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的篩選
        2.4.4 培養(yǎng)基發(fā)酵條件的優(yōu)化
        2.4.5 粗體物制備方法
        2.4.6 抑菌物質(zhì)熱穩(wěn)定性的測(cè)定
        2.4.7 抑菌物質(zhì)酸堿穩(wěn)定性測(cè)定
    2.5 脂肽化合物的純化及鑒定
        2.5.1 脂肽類抗生素合成酶相關(guān)基因克隆
        2.5.2 硅膠柱層析
        2.5.3 Sephadex LH-20 柱層析
        2.5.4 薄層色譜分析（TLC）
        2.5.5 液質(zhì)聯(lián)用分析
    2.6 Bacillus velezensis Y8 對(duì)甘蔗的促生及生防作用研究
        2.6.1 Bacillus velezensis Y8 綠色熒光蛋白標(biāo)記
        2.6.2 Bacillus velezensis Y8 接種甘蔗
        2.6.3 熒光顯微鏡和掃描電子顯微鏡檢測(cè)
        2.6.4 溫室試驗(yàn)和細(xì)菌的重新分離
        2.6.5 甘蔗幾丁質(zhì)酶、苯丙氨酸解氨酶和β-1,3-葡聚糖酶活性的測(cè)定
        2.6.6 甘蔗黑穗病的分離純化
        2.6.7 甘蔗黑穗病基因組DNA提取
        2.6.8 甘蔗黑穗病菌的PCR檢測(cè)
        2.6.9 Bacillus velezensis Y8與甘蔗黑穗病的體外拮抗實(shí)驗(yàn)
        2.6.10 溫室田間生防實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 甘蔗內(nèi)生細(xì)菌的分離純化和鑒定
        3.1.1 芽孢桿菌的分離
        3.1.2 芽孢桿菌系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
        3.1.3 芽孢桿菌的促生菌（PGPR）特性
    3.2 芽孢桿菌抗真菌活性檢測(cè)及次生代謝基因篩選
        3.2.1 芽孢桿菌與真菌的體外拮抗實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
        3.2.2 芽孢桿菌的幾種次生代謝產(chǎn)物合成酶基因的PCR檢測(cè)結(jié)果
    3.3 芽孢桿菌屬指紋圖譜分析
        3.3.1 BOX-PCR基因指紋圖譜分析
        3.3.2 ERIC-PCR基因指紋圖譜分析
        3.3.3 REP-PCR基因指紋圖譜分析
        3.3.4 （GTG）5-PCR基因指紋圖譜分析
    3.4 Bacillus velezensis Y8 發(fā)酵條件優(yōu)化及抗菌物質(zhì)提取
        3.4.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基篩選結(jié)果
        3.4.2 接種量對(duì)抗生素產(chǎn)量的影響
        3.4.3 初始pH值對(duì)抗生素產(chǎn)量的影響
        3.4.4 培養(yǎng)溫度對(duì)抗生素產(chǎn)量的影響
        3.4.5 不同轉(zhuǎn)速對(duì)抗生素產(chǎn)量的影響
        3.4.6 最佳粗提物制備方法
        3.4.7 溫度對(duì)抑菌物質(zhì)穩(wěn)定性的影響
        3.4.8 酸堿度對(duì)抑菌物質(zhì)穩(wěn)定性的影響
    3.5 脂肽化合物的純化及鑒定
        3.5.1 脂肽類基因同源性分析結(jié)果
        3.5.2 硅膠柱層析及薄層色譜分析
        3.5.3 Sephadex LH-20 柱結(jié)果分析
        3.5.4 液質(zhì)聯(lián)用鑒定結(jié)果
    3.6 Bacillus velezensis Y8 對(duì)甘蔗的促生及生防作用研究
        3.6.1 Bacillus velezensis Y8 在甘蔗中的定殖
        3.6.2 溫室促生實(shí)驗(yàn)
        3.6.3 接種BacillusvelezensisY8 對(duì)甘蔗中幾丁質(zhì)酶、苯丙氨酸解氨酶和β-1,3-葡聚糖酶活性的影響
        3.6.4 Bacillus velezensis Y8 體外拮抗黑穗病結(jié)果
        3.6.5 田間生防實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4 討論
    4.1 甘蔗內(nèi)生芽孢桿菌的分離純化和鑒定
    4.2 芽孢桿菌抗真菌活性及次生代謝基因篩選
    4.3 芽孢桿菌屬指紋圖譜分析
    4.4 Bacillus velezensis Y8 發(fā)酵條件優(yōu)化及抗菌物質(zhì)提取
    4.5 脂肽化合物的純化及鑒定
    4.6 Bacillus velezensis Y8 對(duì)甘蔗的促生及生防作用研究
5 結(jié)論
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 論文創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 問(wèn)題與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3157840