水稻功能基因組學的快速發(fā)展,不但為水稻遺傳研究提供有力的工具,也為育種者通過分子標記定向改良水稻品種提供了可靠的信息支持�？尚懈咝У幕蚨ㄏ蚋牧夹枰娴亓私饽繕诵誀畹倪z傳基礎,開發(fā)DNA分子標記,篩選驗證與目標性狀關聯(lián)的分子位點,從而精確地設計育種方案。然而,兼具高密度、高準確率、檢測簡便并低成本的分子標記技術體系的缺乏,阻礙了分子標記在育種中的實踐應用。隨著水稻基因組計劃的不斷深入,以SNP（單核苷酸多態(tài)性）為核心的新一代分子標記將大幅度提高分子標記育種效率。在SNP分型技術中,KASP（競爭性等位基因PCR）檢測方法支持低、中、高通量SNP檢測,且成本低、準確性高,具有良好的應用前景。本研究針對性地檢索國際水稻基因組數(shù)據(jù)庫和文獻資源,獲得批量的有用SNP位點,以481份廣泛分布于國內(nèi)外的水稻種質(zhì)為材料,設計開發(fā)覆蓋水稻全基因組的基于KASP基因分型技術的SNP標記體系。以與水稻產(chǎn)量及品質(zhì)高度相關的籽粒為目標性狀,展開分子標記與性狀的關聯(lián)研究。主要研究結(jié)果如下:1、利用Wx_Intron1_K、Badh2-E7、ALK和Pita標記的Sang... 

【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學廣東省

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

KASP原理示意圖

綠色數(shù)據(jù)點）；為確保結(jié)果的可靠性，必須包括沒有任何模板 DNA 的 KASP 反應作為陰性對照，這通常被稱為空白對照或 NTC，NTC 將不產(chǎn)生任何熒光，因此數(shù)據(jù)點將繪制在原點（圖 2 中的黑色數(shù)據(jù)點）。具有相同基因型的所有樣品將產(chǎn)生相似水平的熒光，因此在圖上所有樣品都靠近在一起�；谶@些簇的相對位置，可以確定所有數(shù)據(jù)點的基因型。

Wx_Intron1_K 標記針對 Wxb基因的第一個內(nèi)含子+1 位點的 G/T SNP 設計而成，能夠區(qū)分單堿基 G/G、T/T 和 G/T 三種基因型。利用已知基因型的材料（編號為 C286、C289、C290、C291 的材料為基因型為 T/T；編號為 C279、C280、C281 的材料基因型為 G/G；編號 C250、C251、C252、C253 的材料基因型為 T/G。對該標記進行 KASP擴增體系的檢測，所得到的 KASP 分型結(jié)果如圖 3-a�；蛐头謩e為 T/T、G/G 和 T/G的材料顯示了不同的熒光信號并根據(jù)其熒光信號很明顯地聚集在左上角、右下角及其中間，各個基因型得到了良好的區(qū)分。為了驗證 KASP 結(jié)果的準確性，將其與 Sanger測序的結(jié)果進行對比。測序結(jié)果（圖 3-b、c、d）表明，純合基因型 T/T、G/G 的材料C286、C289、C290、C291、C279、C280、C281 顯示了對應的單峰，而雜合基因型T/G 的材料 C250、C251、C252、C253 則顯示雙峰�？梢姡琄ASP 標記 Wx_Intron1_K的分型結(jié)果與 Sanger 測序的結(jié)果完全一致。

【參考文獻】：
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碩士論文
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[3]高分辨率熔解曲線分析技術（HRM）系統(tǒng)的建立及其在基因多態(tài)性和突變檢測方面的應用[D]. 潘登.復旦大學 2013
[4]TD70/Kasalath RIL群體遺傳圖譜的構(gòu)建及粒型性狀的QTL定位[D]. 張穎慧.南京農(nóng)業(yè)大學 2011
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本文編號：3048253