發(fā)布時(shí)間：2020-08-17 08:07

【摘要】：厚樸酚及和厚樸酚為我國(guó)著名藥用植物厚樸的主要活性成分,具有抗病毒、抗腫瘤、抗菌、抗?jié)�、抗炎、防齲等藥理作用,應(yīng)用廣泛、需求量大。厚樸酚與和厚樸酚來源于厚樸或凹葉厚樸的根皮及枝皮,隨著其市場(chǎng)的擴(kuò)大,厚樸資源慘遭破壞。本研究以秦巴山區(qū)厚樸為試材,分析其內(nèi)生真菌生物多樣性,初步建立秦巴山區(qū)厚樸內(nèi)生真菌種質(zhì)資源庫(kù);篩選代謝產(chǎn)生厚樸酚及和厚樸酚的內(nèi)生真菌,并采用L_9(3~4)正交試驗(yàn)對(duì)產(chǎn)酚內(nèi)生真菌的培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,為下一步利用微生物發(fā)酵法制備厚樸酚及和厚樸酚奠定基礎(chǔ)。1.秦巴山區(qū)厚樸內(nèi)生真菌的分離及初步鑒定利用組織培養(yǎng)法對(duì)秦巴山區(qū)不同地域厚樸進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離,共獲得151株純培養(yǎng)菌株,初步鑒定出144株,其分屬于6目,7科,16屬。其中,青霉屬(Penicillium)21株、鐮刀菌屬(Fusarium)18株、毛霉屬(Mucor)15株,為優(yōu)勢(shì)類群,分別占總菌數(shù)的13.91%、11.92%和9.93%。其余7株真菌由于其不產(chǎn)生孢子或無特征菌絲結(jié)構(gòu),無法用經(jīng)典形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,秦巴山區(qū)厚樸內(nèi)生真菌具有一定的物種多樣性,且不同組織部位對(duì)內(nèi)生真菌的豐度有一定影響。分離自莖部的內(nèi)生真菌數(shù)量和種類最多,其次是根部,葉中最少;另外,不同采樣地點(diǎn)厚樸內(nèi)生真菌數(shù)量及種類存在一定相似性及差異。2.產(chǎn)厚樸酚及和厚樸酚內(nèi)生真菌的篩選及鑒定對(duì)151株內(nèi)生真菌進(jìn)行液體搖瓶發(fā)酵,然后對(duì)發(fā)酵液依次進(jìn)行抽濾,乙酸乙酯萃取,負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到萃取物。通過高效液相色譜儀(HPLC)、超高效液相-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(UPLC-MS/MS)對(duì)萃取物中的厚樸酚及和厚樸酚進(jìn)行檢測(cè),共篩選出14株產(chǎn)酚菌株,占此次分離內(nèi)生真菌總數(shù)的9.93%,其中青霉屬(Penicillium)6株,占產(chǎn)酚菌株總數(shù)的42.86%;曲霉屬(Aspergillus)2株,占產(chǎn)酚菌株總數(shù)的14.29%;其余6株分別為:毛霉屬(Mucor)、木霉屬(Trichoderma)、鐮刀菌屬(Fusarium)、交鏈孢霉屬(Alternaria)、粘帚霉屬(Clonostachys)和蠟蚧菌屬(Lecanicillium),各占產(chǎn)酚菌株總數(shù)的7.14%。在上述產(chǎn)酚菌株中,以菌株Y-18和Y-88的產(chǎn)量最高。菌株Y-18和厚樸酚的產(chǎn)量為532.443μg/L,而菌株Y-88厚樸酚及和厚樸酚的產(chǎn)量分別為579.140μg/L、471.627μg/L。經(jīng)過形態(tài)學(xué)觀察和ITS序列分析將菌株Y-18鑒定為半知菌亞門(Deuteromycotina),絲孢綱(Hyphomycetes),絲孢目(Hyphomycetales),粘帚霉屬,粉紅粘帚霉(Clonostachys rosea);將菌株Y-88鑒定為半知菌亞門,絲孢綱,叢梗孢目(Moniliales),叢梗孢科(Moniliaceae),蠟蚧菌屬,Lecanicillium saksenae。3.菌株Y-88的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件優(yōu)化以碳源、氮源、MgSO_4·7H_2O和KH_2PO_4為影響因素,以厚樸酚與和厚樸酚的產(chǎn)量為考察指標(biāo),在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用L_9(3~4)正交試驗(yàn)對(duì)菌株Y-88的培養(yǎng)基組成進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化得到菌株Y-88發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)厚樸酚最佳配方(g/L):葡萄糖20.00、蛋白胨6.00、KH_2PO_4 4.00、MgSO_4·7H_2O 3.00、VB_1 0.10,水1 L,產(chǎn)量為702.261±32.016 ug/L,較優(yōu)化前提高21.26%;優(yōu)化得到菌株Y-88發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)和厚樸酚最佳配方(g/L):葡萄糖20.00、蛋白胨6.00、KH_2PO_4 5.00、MgSO_4·7H_2O5.00、VB_1 0.10,水1 L,和厚樸酚產(chǎn)量為559.309±19.395 ug/L,較優(yōu)化前提高18.59%;優(yōu)化得到菌株Y-88產(chǎn)厚樸酚及和厚樸酚最佳培養(yǎng)條件:培養(yǎng)時(shí)間12 d、培養(yǎng)溫度27℃、pH 7.5、接種量15%、轉(zhuǎn)速120 r/min,此條件下厚樸酚產(chǎn)量為1153.816±21.643 ug/L,較優(yōu)化前又提高64.30%,和厚樸酚產(chǎn)量為812.527±41.349 ug/L,較優(yōu)化前又提高45.27%。
【學(xué)位授予單位】：陜西理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：Q93;S567.11
【圖文】：

幼時(shí)有絹毛；頂芽大，狹卵狀圓錐形；辛香特異，姜辣味，有灼舌感而后苦[9]。厚樸主要分布在湖北西部、四川西南部、陜西南部及甘肅南部；凹葉厚樸主要分布在江西、浙江、福建、安徽、湖南、廣西及廣東北部[10-11]。陜南厚樸為陜西特產(chǎn)藥材，自古有名，與湖北紫油厚樸、湖南厚樸、福建浦城厚樸、浙江厚樸、貴州油厚樸齊名，并稱為全國(guó)六大著名厚樸[12]。厚樸在我國(guó)藥用歷史悠久，其樹皮、根皮、花、種子及芽皆可用藥。皮能化濕導(dǎo)滯、行氣平喘、化食消痰、祛風(fēng)鎮(zhèn)痛；花有寬中利氣、開郁化濕的功效；種子能明目益氣，并可治蟲癭；芽可做婦科用藥[13-14]。

厚樸酚簡(jiǎn)介厚樸酚的理化性質(zhì)020）（圖 1-2），別名 5',5-二烯丙基-2,2'-聯(lián)苯二酚，為白色C18H18020）（圖 1-3），別名 3',5-二-2-丙烯基-1,1'-聯(lián)苯-2,4'粉末。厚樸酚與和厚樸酚互為同分異構(gòu)體，化學(xué)性質(zhì)相似，藍(lán)黑色；與 Millon 試劑反應(yīng)，現(xiàn)棕色沉淀；與間苯三酚鹽者雖互為同分異構(gòu)體，物理性質(zhì)卻相差較大，如厚樸酚熔點(diǎn)卻為 87.5 ℃。蘇德輝等[21]利用厚樸酚與和厚樸酚在同差異，試驗(yàn)得出在 60 ℃時(shí)，和厚樸酚在環(huán)己烷的溶解度是

厚樸酚簡(jiǎn)介厚樸酚的理化性質(zhì)020）（圖 1-2），別名 5',5-二烯丙基-2,2'-聯(lián)苯二酚，為白色C18H18020）（圖 1-3），別名 3',5-二-2-丙烯基-1,1'-聯(lián)苯-2,4'粉末。厚樸酚與和厚樸酚互為同分異構(gòu)體，化學(xué)性質(zhì)相似，藍(lán)黑色；與 Millon 試劑反應(yīng)，現(xiàn)棕色沉淀；與間苯三酚鹽者雖互為同分異構(gòu)體，物理性質(zhì)卻相差較大，如厚樸酚熔點(diǎn)卻為 87.5 ℃。蘇德輝等[21]利用厚樸酚與和厚樸酚在同差異，試驗(yàn)得出在 60 ℃時(shí)，和厚樸酚在環(huán)己烷的溶解度是

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本文編號(hào)：2795056