【摘要】：人參(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋參(P.quinquefolius Linn.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.Chen)為五加科人參屬代表藥用植物,具有頗高的藥用和經濟價值。本試驗首先以裂口人參種子、西洋參愈傷組織和三七愈傷組織為試材,通過探討裝載時間、脫水時間、冷凍保護劑種類等對其超低溫保存成活率的影響,建立起三者的超低溫保存體系;再以凍存過程中的西洋參愈傷組織為試材,通過生理生化指標測定和超微結構觀察,初步探討其超低溫保存存活機制,主要研究結果如下:1.人參裂口種子最佳超低溫保存方法為:將含水量為10%的裂口種子裝入凍存管密封后,迅速投入液氮,一周后取出,40℃水浴解凍,土播。30d后,統(tǒng)計出苗率可達85.80%。SSR分子標記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。2.西洋參愈傷組織最佳超低溫保存程序為:將快速生長期的西洋參愈傷組織放入凍存管,加入60%PVS2溶液(MS+30%甘油+15%乙二醇+15%DMSO+0.4MSuc)室溫處理20min,隨后將溶液更換成100%PVS2,0℃處理40min后,迅速投入液氮,48h后取出,40℃水浴解凍,洗滌�；謴团囵B(yǎng)60d后統(tǒng)計存活率為45%。SSR分子標記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。3.三七愈傷組織最佳超低溫保存過程為:將快速生長期的三七胚性愈傷組織轉入凍存管后,加入冷凍保護劑PVS3溶液(MS+40%甘油+40%蔗糖),室溫下處理30min后更換新鮮冷凍保護劑,置于程序降溫儀,放入-80℃冰箱12h后,投入液氮,保持48h。取出,40℃水浴解凍,洗滌�；謴团囵B(yǎng)30d后統(tǒng)計存活率為80%。SSR分子標記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。4.對西洋參愈傷組織超低溫保存過程中可溶性蛋白質、丙二醛(MDA)和過氧化物酶(POD)的測定結果表明:蛋白質含量在裝載和脫水過程中增加,MDA含量下降,POD酶活性上升,解凍后細胞的蛋白質含量開始下降,MDA含量劇增,POD酶活性有所下降。透射電鏡超微結構觀察發(fā)現(xiàn),西洋參愈傷組織細胞在經過玻璃化液脫水處理后發(fā)生質壁分離,隨著液氮凍存和解凍加深了質壁分離的程度,部分細胞受到不可逆的傷害,部分細胞經過恢復培養(yǎng)恢復正常生長。綜上,本試驗建立起人參、西洋參和三七組培材料的超低溫保存體系,可為其種質資源的保存提供材料基礎和理論依據(jù);對其超低溫保存過程中的細胞結構和化學物質進行研究,以期為西洋參愈傷組織凍存機制的探討以及超低溫保存技術的優(yōu)化提供理論參考依據(jù)。
【學位授予單位】：吉林農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S567.51;S567.53;S567.236
【圖文】：

含水量對超低溫保存前后人參裂口種子生活力的影響

注：a 為人參對照組，b 為人參樣品組。圖 1.2 超低溫保存再生材料和與對照組Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and control1.3.1.5 SSR 分子標記結果參考楊成君等[11]關于人參 EST-SSR 的報道，以 pg668 為引物（上游序列CTGGCATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGAGG），對超低溫保存前后的人參裂口種子遺傳穩(wěn)定性進行分析，見圖 1.3，結果表明：對照組與處理組相比均無差異條帶，人參超低溫保存材料具有較高的遺傳穩(wěn)定性。

注：a 為人參對照組，b 為人參樣品組。圖 1.2 超低溫保存再生材料和與對照組Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and controlSR 分子標記結果楊成君等[11]關于人參 EST-SSR 的報道，以 pg668 為引物（上游ATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGA保存前后的人參裂口種子遺傳穩(wěn)定性進行分析，見圖 1.3，結果表處理組相比均無差異條帶，人參超低溫保存材料具有較高的遺傳

【參考文獻】

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本文編號：2768401