【摘要】：本課題從蘄春蘄艾(Artemisia argyi)根莖部分離純化得到一株內(nèi)生真菌命名為HCH285,之后進(jìn)行菌種鑒定、bostrycin方法學(xué)構(gòu)建,同時(shí)對該HCH285內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物和bostrycin進(jìn)行安全性和活性分析,主要結(jié)果如下:1.HCH285菌種鑒定。利用微生物學(xué)與分子生物學(xué)兩種方法對HCH285內(nèi)生真菌進(jìn)行鑒定。微生物形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)菌落呈圓形,生長初期為白色絨狀毛且生長蓬松,后期逐漸成紅色且菌落背面的紅色產(chǎn)物也清晰可見。HCH285菌絲體為無色有隔菌絲。它產(chǎn)單個(gè)、球形或橢圓形、黑色光滑的分生孢子。此外通過分子生物學(xué)技術(shù)對其ITS序列測定確定該菌株屬于黑孢霉屬球黑孢霉菌(Nigrospora oryzae)。2.HCH285內(nèi)生菌產(chǎn)bostrycin分離制備方法建立。利用多種化學(xué)試劑對HCH285內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物提取,確定乙酸乙酯為最佳萃取試劑,以半制備液相進(jìn)行化合物分離,優(yōu)化卷線孢菌素bostrycin的HPLC制備方法,使用高效分析型液相檢測分離純度,其分離制備方法為:柱溫:30℃,進(jìn)樣體積:700μL,流速:3 mL/min,流動(dòng)相比例:甲醇:0.3%甲酸=50:50(v/v),檢測時(shí)間:30 min,紫外檢測:302 nm;采用400MH_Z核磁共振波譜儀進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定確定為卷線孢菌素bostrycin。3.Bostrycin活性分析。Bostrycin抗氧化活性分析證明,對三種自由基抗性順序由大到小為O_2~ DPPH~ OH~ 。它的抗菌活性表明有較好的抗菌作用,對革蘭氏陽性菌比革蘭氏陰性菌較好。CCK-8法體外抗癌活性研究表明對U251,B10F16癌細(xì)胞的半致死濃度分別為4.30μM和6.05μM。4.Bostrycin及HCH285菌代謝色素的安全性分析。引入秀麗隱桿線蟲(C. elegans)為生測材料,以食品級紅曲紅色素為對照,研究對C.elegans各生理指標(biāo)的影響。試驗(yàn)表明HCH285菌產(chǎn)色素對C.elegans的急性與慢性毒性、攝食與運(yùn)動(dòng)能力、生長發(fā)育狀態(tài)、卵塊孵化率,均沒有明顯抑制作用且與食品級紅曲紅色素作用效果一致,綜合各指標(biāo)顯示500μg/mL內(nèi)為安全劑量。以相同方法和指標(biāo),分析bostrycin對C.elegans作用,確定劑量在10μg/mL內(nèi)無毒副作用。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S567.239;Q93

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1 楊倩;蘄艾內(nèi)生菌HCH285的卷線孢菌素活性及安全性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

本文編號：2738254