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土壤DNA提取技術(shù)在本科教學實驗教學中的應用

發(fā)布時間:2021-02-24 21:41
  開展科研訓練、提高學生科學素養(yǎng),一直是本科教學改革研究熱點之一。以課題組常用的實驗技術(shù)"土壤DNA提取"為基礎(chǔ),結(jié)合"大學生科技創(chuàng)新"等活動,設計綜合創(chuàng)新實驗,對可能參與課題組科研工作的學生進行選拔和培訓。綜合創(chuàng)新實驗提高了學生的科研能力、訓練了學生的科研思維,使學生順利的參與到教師的科研工作中,實現(xiàn)了教學與科研的相互融合。 

【文章來源】:科教導刊(上旬刊). 2019,(06)

【文章頁數(shù)】:2 頁

【部分圖文】:

土壤DNA提取技術(shù)在本科教學實驗教學中的應用


不同方法提取總DNA的瓊脂糖凝膠電泳圖圖

凝膠電泳,PCR擴增,方法


2019年/第16期/6月(上)125方法3:創(chuàng)新性配置腐殖酸吸附劑2ml(0.2mol/L納米TiO2;0.1%活性炭)混合充分震蕩1min;之后操作參考文獻[6]并加以改進。最終用冷的70%乙醇洗滌沉淀2次,用TE緩沖液溶解沉淀,最終體積為50L。2.3DNA濃度和純度的檢測采用紫外分光光度法分別測定粗制DNA溶液的光密度值OD260,OD230,OD280,根據(jù)公式:[dsDNA]=50×OD260×稀釋倍數(shù),計算DNA的濃度(單位為g/mL),換算出每克干土提取DNA的量,根據(jù)OD230/OD260,OD260/OD280估算DNA的純度。2.4PCR采用細菌16SrDNA基因的通用引物進行擴增,擴增后得到250bp左右的片段。3實驗結(jié)果3.1土壤總DNA的提取和檢測本研究所提取的土壤DNA經(jīng)核酸蛋白測定儀檢測,其濃度依次為每克土壤10.4~13.8g、15.6~20.7g、24.9~30.8g,其中方法3土壤DNA提取得率最高(表1)。DNA樣品的純度使用OD260/OD280和OD260/OD230兩個指標檢測,從表1可以看出,降低蛋白質(zhì)污染的效果方法3(1.645~1.814)優(yōu)于方法1(1.545~1.731)和方法2(1.548~1.666);降低腐殖質(zhì)污染的效果方法3(1.82~2.19)和方法1(1.71~2.50)相近,優(yōu)于方法2(1.66~1.71)。表1土壤總DNA的提取量和純度Ns∕shMs鐻sMsHMsHNs趘嘧iHihi枘H魔h魔?袛GP桮悥G悧G0擥皸G癹衛(wèi)衚恗Pm餴0m@韢韢漓}犿}@題飣kmH鑜H3.2PCR擴增結(jié)果三種方法的瓊脂糖凝膠電泳效果見圖1。方法3所得的DNA濃度較高。對所得的DNA進行16SDNA擴增(圖2),方法3所得的DNA條帶清晰、明亮,說明擴增產(chǎn)物濃度較高,DNA模板獲得有效擴增。綜合以上結(jié)果,方法3?

【參考文獻】:
期刊論文
[1]基于開放實驗室的大學生科研訓練項目實例[J]. 蒲賢潔,歐增福,韓忠,何光宏.  實驗技術(shù)與管理. 2017(03)
[2]探究型實驗的思路、模式與路徑——基于浙江大學的探索與實踐[J]. 陸國棟,李飛,趙津婷,劉向東.  高等工程教育研究. 2015(03)
[3]細胞生物學“半開放設計性實驗”教學的意義與實施方法[J]. 薛雅蓉,劉常宏.  實驗技術(shù)與管理. 2013(08)



本文編號:3049980

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