青海云杉(Picea crassifolia Kom.)是松科(Pinaceae)云杉屬(Picea)的木本植物,常綠喬木,是青藏高原東北邊緣特有的森林樹(shù)種,也是西北地區(qū)重要的造林和城市綠化樹(shù)種,在祁連山乃至西北地區(qū)生態(tài)建設(shè)中發(fā)揮著不可替代的作用。目前國(guó)內(nèi)對(duì)青海云杉的種子萌發(fā)特性、表型變異、同工酶遺傳變異等研究已有文獻(xiàn)報(bào)道,但是基于SSR標(biāo)記的青海云杉的研究和應(yīng)用還鮮有報(bào)道。本研究主要包含兩部分的內(nèi)容:(1)青海云杉SSR-PCR反應(yīng)體系的建立和優(yōu)化,以及引物的篩選;(2)基于SSRs的青海云杉無(wú)性系的遺傳多樣性和親緣關(guān)系研究。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素分析方法,建立并優(yōu)化了青海云杉的SSR-PCR反應(yīng)體系。結(jié)果顯示,青海云杉SSR-PCR最適反應(yīng)體系為總體積為20.0μL,包括模板DNA(5-10 ng·μL-1)1.0μL、dNTP(10 mmol·L-1)0.45μL、正反向引物(10μmol·L-1)0.25μL、Mg2+(25 mmol·L-1)2.0μL、Taq DNA聚合酶(5 U·μL-1)0.8μL、10×PCR緩沖液2.0μL、HPLC超純水13.25μL。PCR擴(kuò)增...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-2青海云杉無(wú)性系基因組DNA

(260/280)約為1.8，符合進(jìn)行ISSR-PCR反應(yīng)的要求，最后將青海云杉的DNA產(chǎn)物放入-20℃冰箱中保存以備用。青海云杉無(wú)性系部分基因組DNA電泳圖譜如圖2-2所示。

圖4-2青海云杉SSR-PCR反應(yīng)體系的瓊脂糖凝膠電泳圖譜

SSR引物篩選圖4-2青海云杉SSR-PCR反應(yīng)體系的瓊脂糖凝膠電泳圖譜Fig.4-2ElectrophoreticpatternsofSSR-PCRreactionsystemforQinghaispruce

圖4-2青海云杉SSR引物篩選電泳圖譜

圖4-2為青海云杉無(wú)性系編號(hào)1-30的EAC1A07引物SSR-PCR擴(kuò)增電泳結(jié)圖4-2青海云杉SSR引物篩選電泳圖譜Fig.4-2ElectrophoreticpatternsofSSRprimerselectionforQinghai....

圖3-3a上圖基于SSRs和Dice相似性系數(shù)的青海云杉109個(gè)無(wú)性系聚類(lèi)圖

Dice’sSimilarityCoefficient圖3-3a上圖基于SSRs和Dice相似性系數(shù)的青海云杉109個(gè)無(wú)性系聚類(lèi)圖Fig.3-3aUpperclusterofUPGMAdendrogramfor109clonesofP.....

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