EIN3是乙烯信號轉(zhuǎn)導途徑上一個重要的轉(zhuǎn)錄因子,該基因的表達能夠啟動一系列調(diào)節(jié)乙烯的目標基因的表達,對乙烯反應起正調(diào)控作用,同時還可以通過乙烯信號與其他信號的交叉反應影響植物多種生理生化過程。為了揭示白樺轉(zhuǎn)BpEIN3基因功能,本實驗研究以白樺（Betula platyphylla）為遺傳轉(zhuǎn)化受體,進行白樺BpEIN3基因的表達特性分析,同時構(gòu)建BpEIN3過表達、抑制表達載體并轉(zhuǎn)化白樺,獲得BpEIN3轉(zhuǎn)基因株系,闡述該基因的功能,為后續(xù)揭示BpEIN3基因調(diào)控白樺葉片衰老及細胞程序化死亡分子機理提供參考。研究結(jié)果如下:BpEIN3基因表達特性研究表明,用先前已獲得的PromEIN3::CUS白樺株系為材料,PCR檢測結(jié)果為陽性;對獲得的轉(zhuǎn)PromEIN3::GUS株系進行ET、IAA、MeJA、SA、GA激素進行不同時間處理,以處理后的轉(zhuǎn)基因株系為材料,進行GUS表達量分析及其活性的測定,結(jié)果表明,在不同激素處理下,轉(zhuǎn)PromEIN3::GUS白樺株系GUS的表達量及活性均有不同程度的上升,說明BpEIN3基因?qū)Σ煌募に鼐许憫?且響應效果不一致。實驗采用農(nóng)桿菌介導法開展轉(zhuǎn)BpE... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 EIN3基因功能及研究進展
        1.1.1 EIN3是乙烯信號轉(zhuǎn)導途徑上重要的轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.2 EIN3是乙烯與其他激素交叉對話的重要節(jié)點
    1.2 植物類病斑的產(chǎn)生及特征
        1.2.1 植物葉片類病斑產(chǎn)生因素
        1.2.2 植物類病斑突變體的激素信號途徑
    1.3 植物葉片衰老的產(chǎn)生及特征
        1.3.1 影響植物葉片衰老的外部因素
        1.3.2 影響植物葉片衰老的內(nèi)部因素
    1.4 研究的目的意義
    1.5 技術(shù)路線
2 BpEIN3基因表達特性分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實驗試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 Prom_(EIN3)::GUS白樺的PCR檢測
        2.2.2 轉(zhuǎn)Prom_(EIN3)::GUS白樺的激素處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 轉(zhuǎn)Prom_(EIN3)::GUS白樺的獲得
        2.3.2 Bp_(EIN3)基因?qū)に氐膽鹛匦?br>    2.4 本章小節(jié)
3 白樺BpEIN3基因的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 載體與菌株
        3.1.3 酶及試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 BpEIN3基因的獲得及生物信息學分析
        3.2.2 BpEIN3基因的克隆及超表達載體構(gòu)建
        3.2.3 農(nóng)桿菌介導白樺合子胚遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 BpEIN3基因的生物信息學分析
        3.3.2 35::BpEIN3表達載體的獲得
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因白樺的獲得
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測
    3.4 本章小結(jié)
4 白樺BpEIN3抑制表達株系出現(xiàn)類病斑早衰
    4.1 實驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 抑制表達株系葉片類病斑觀察
        4.2.2 抑制表達株系光合、葉綠素熒光參數(shù)測定及生長調(diào)查
        4.2.3 組織化學法檢測抑制表達株系葉片中的H_2O_2和O_2
        4.2.4 抑制表達株系葉片中SOD、POD、CAT酶活測定
        4.2.5 抑制表達株系葉片ABA、JA、SA含量的測定
        4.2.6 抑制表達株系葉片抗葉枯病檢測
        4.2.7 抑制表達株系相關(guān)基因的qRT-PCR分析
    4.3 數(shù)據(jù)處理
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 BpEIN3抑制表達白樺葉片類病斑的出現(xiàn)
        4.4.2 BpEIN3抑制表達株系生長及光合參數(shù)比較
        4.4.3 BpEIN3抑制表達株系葉片中H_2O_2及O_(2-)的積累
        4.4.4 BpEIN3抑制表達株系葉片中主要抗氧化酶含量比較
        4.4.5 BpEIN3抑制表達株系葉片主要內(nèi)源激素的測定
        4.4.6 BpEIN3抑制表達株系抗葉枯病能力的提高
        4.4.7 BpEIN3抑制表達株系葉片不同發(fā)育時期相關(guān)基因表達特性分析
    4.5 本章小結(jié)
5 結(jié)論與討論
    5.1 結(jié)論
    5.2 討論
        5.2.1 BpEIN3基因表達特性分析
        5.2.2 植物類病斑引發(fā)葉片早衰
        5.2.3 植物葉片早衰伴隨葉片激素含量改變及上調(diào)衰老相關(guān)基因
        5.2.4 EIN3參與調(diào)控葉片早衰形成類病斑
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3714604