癭椒樹是我國特有的古老樹種,其果實(shí)發(fā)育經(jīng)歷冬季的停滯階段,周期長達(dá)十五個月之久,果實(shí)越年成熟也是導(dǎo)致其自然更新能力弱的重要原因之一。近些年來,有關(guān)癭椒樹果實(shí)越冬延遲發(fā)育機(jī)制的相關(guān)研究還處于起步階段,而基于逆境脅迫方面的研究此前也未曾有過報道。因此,我們將聚焦果實(shí)發(fā)育停滯期至恢復(fù)發(fā)育階段,探究其越冬的分子機(jī)制。首先,通過外部形態(tài)和石蠟切片對癭椒樹果實(shí)的發(fā)育周期進(jìn)行觀察,掌握了果實(shí)發(fā)育過程中形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化規(guī)律。接著,選取果實(shí)發(fā)育的四個時期進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,基于癭椒樹全基因組數(shù)據(jù)以及轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,結(jié)合生物信息學(xué)分析方法,了解該過程基因表達(dá)變化規(guī)律,根據(jù)以往ABA信號通路在非生物脅迫方面的研究,參考轉(zhuǎn)錄組中幾個差異表達(dá)基因（DEGs）的顯著性參數(shù),找到通路中Sn RK2基因。通過對幾個Sn RK2基因序列的比對和鑒定、蛋白理化性質(zhì)和高級結(jié)構(gòu)的預(yù)測,了解幾個Sn RK2基因的特點(diǎn)。我們使用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)一步對顯著性最高的TsSnRK2.3基因進(jìn)行表達(dá)模式分析,并制備擬南芥原生質(zhì)體對TsSnRK2.3蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位。最后,我們在擬南芥中過表達(dá)TsSnRK2.3基因,初步對該基因進(jìn)行功... 

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞對照表
第一章 緒論
    1.1 癭椒樹的研究背景及研究進(jìn)展
        1.1.1 癭椒樹在我國的分類分布情況
        1.1.2 癭椒樹特有的繁育系統(tǒng)
    1.2 轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-Seq)技術(shù)是揭示生命科學(xué)規(guī)律的重要手段
        1.2.1 測序技術(shù)的發(fā)展概況
        1.2.2 RNA-Seq技術(shù)在非模式植物中的應(yīng)用
    1.3 蔗糖非酵解蛋白激酶2(SnRK2s)
        1.3.1 SnRK2s的結(jié)構(gòu)介紹
        1.3.2SnRK2 的活性調(diào)節(jié)及其在ABA通路中的作用
        1.3.3 SnRK2參與植物非生物脅迫調(diào)節(jié)
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 癭椒樹果實(shí)發(fā)育的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化
    2.1 材料、試劑和儀器
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及配制方法
        2.1.3 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 石蠟切片
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 果實(shí)越冬到發(fā)育時期形態(tài)變化
    2.4 討論
第三章 癭椒樹越冬果實(shí)的轉(zhuǎn)錄組測序分析
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 數(shù)據(jù)分析軟件
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 樣品總RNA的提取及樣品質(zhì)量的檢測
        3.2.2 文庫構(gòu)建、檢測和測序
        3.2.3 原始數(shù)據(jù)的質(zhì)量評估
        3.2.4 參考基因的比對分析
        3.2.5 基因表達(dá)水平和差異表達(dá)基因(DEGs)分析
        3.2.6 差異基因GO富集分析
        3.2.7 差異基因KEGG富集分析
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量評估
        3.3.2 參考序列在基因組中的比對情況
        3.3.3 四個時期差異基因表達(dá)情況
        3.3.4 差異表達(dá)基因的富集分析
    3.4 討論
第四章 SnRK2基因的篩選、鑒定、表達(dá)分析和亞細(xì)胞定位
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 試劑配制和儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 癭椒樹果實(shí)四個SnRK2基因在轉(zhuǎn)錄組測序中的表達(dá)分析
        4.2.2 癭椒樹果實(shí)四個SnRK2基因的生物信息學(xué)分析
        4.2.3 TsSnRK2.3 基因的克隆以及Real-time q PCR定量檢測
        4.2.4 不同時期TsSnRK2.3 基因的表達(dá)模式與溫度的相關(guān)性
        4.2.5 TsSnRK2.3 全長的克隆
        4.2.6 TsSnRK2.3 蛋白的亞細(xì)胞定位
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 四個TsSnRK2 基因在轉(zhuǎn)錄組測序中的表達(dá)分析
        4.3.2 四個TsSnRK2 蛋白激酶成員的鑒定和分析
        4.3.3 TsSnRK2.3 基因的表達(dá)模式與溫度成負(fù)相關(guān)
        4.3.4 TsSnRK2.3 蛋白的亞細(xì)胞定位結(jié)果
    4.4 討論
第五章 轉(zhuǎn)TsSnRK2 基因擬南芥的抗性分析
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 試劑和儀器設(shè)備
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 擬南芥種植及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸染
        5.2.3 擬南芥陽性苗的檢測和鑒定
        5.2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的脅迫處理
    5.3 結(jié)果分析
        5.3.1 陽性植株的篩選與鑒定
        5.3.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗性分析
    5.4 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]瀕危植物銀鵲樹研究進(jìn)展(綜述)[J]. 謝春平.  亞熱帶植物科學(xué). 2006(04)
[7]鹽生馬齒莧解剖學(xué)研究[J]. 王桂芹,陳喀林,段亞軍.  植物研究. 2005(04)
[8]高山植物唐古特紅景天粘液細(xì)胞及葉肉細(xì)胞表面糖蛋白與抗凍性的關(guān)系[J]. 盧存福,陳玉珍,簡令成.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2003(01)
[9]鵝耳櫪和虎榛子(樺木科)雌性生殖器官的形態(tài)發(fā)生[J]. 陳之端,邢樹平,梁漢興,路安民.  植物學(xué)報. 2001(11)
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博士論文
[1]枸杞果實(shí)發(fā)育期糖分及其糖代謝相關(guān)基因表達(dá)分析[D]. 趙建華.北京林業(yè)大學(xué) 2016
[2]赤霉素促進(jìn)梨果實(shí)庫強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 李節(jié)法.上海交通大學(xué) 2015
[3]‘紅陽’獼猴桃果實(shí)發(fā)育轉(zhuǎn)錄組及花青素累積機(jī)理研究[D]. 李文彬.中國科學(xué)院研究生院(武漢植物園) 2015

碩士論文
[1]雄全異株植物癭椒樹花果同期發(fā)育的性別分配[D]. 麻力.西北大學(xué) 2013
[2]癭椒樹果實(shí)發(fā)育的研究[D]. 滕麗.西北大學(xué) 2009



本文編號：3655914