發(fā)布時(shí)間：2022-02-20 03:14

　　白花泡桐是我國(guó)特有的速生豐產(chǎn)樹種,具有非常高的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值。利用基因工程技術(shù)對(duì)白花泡桐進(jìn)行品種改良,可以彌補(bǔ)常規(guī)育種方法的不足,加快白花泡桐在遺傳育種方向的發(fā)展。在白花泡桐的生長(zhǎng)過(guò)程中,干旱、鹽害、極端溫度等環(huán)境脅迫因子能夠嚴(yán)重影響其生理活動(dòng)以及生長(zhǎng)發(fā)育。植物通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控相關(guān)基因表達(dá),可以在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)自身生理代謝和生長(zhǎng)發(fā)育達(dá)到調(diào)節(jié)作用。DREB轉(zhuǎn)錄因子在植物中廣泛存在,通過(guò)參與調(diào)控各種功能基因的表達(dá),來(lái)提高植物的抗逆性。本研究在白花泡桐中克隆到白花泡桐的Pf DREB2基因,并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,該基因具有DREB基因的基本特性。主要研究結(jié)果如下:1、本實(shí)驗(yàn)材料為白花泡桐葉片,根據(jù)DREB基因DNA結(jié)合域的保守區(qū)域設(shè)計(jì)并合成簡(jiǎn)并引物,擴(kuò)增出DREB基因的同源片段,根據(jù)此同源片段設(shè)計(jì)特異性引物,通過(guò)RACE技術(shù)獲得白花泡桐DREB基因全長(zhǎng)序列,通過(guò)氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),此基因?yàn)镈REB2轉(zhuǎn)錄因子基因。2、分別以白花泡桐genomic DNA和c DNA為模板PCR擴(kuò)增,通過(guò)對(duì)擴(kuò)增的產(chǎn)物的序列分析發(fā)現(xiàn),該基因不含有內(nèi)含子。3、該基因c DNA序列全長(zhǎng)1049bp,其完整的開放閱... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
英漢縮略詞對(duì)照
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物抗逆分子機(jī)制
        1.1.1 在逆境脅迫中直接發(fā)揮功能的蛋白
            1.1.1.1 LEA蛋白
            1.1.1.2 水通道蛋白
            1.1.1.3 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
        1.1.2 滲透調(diào)節(jié)因子
            1.1.2.1 脯氨酸
            1.1.2.2 甜菜堿
        1.1.3 抗氧化防御相關(guān)酶
            1.1.3.1 POD
            1.1.3.2 SOD
        1.1.4 感應(yīng)傳導(dǎo)脅迫信號(hào)、調(diào)控基因表達(dá)相關(guān)基因
    1.2 植物抗逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.1 bZIP轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.4 AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子
    1.3 DREB轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.1 DREB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.3.2 DREB轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)調(diào)控
        1.3.3 DREB基因在植物抗逆基因工程中的作用
    1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的應(yīng)用
    1.5 白花泡桐概述
2 引言
3 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑和試劑盒
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        3.1.4 常用溶液配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 植物材料培養(yǎng)及脅迫處理
            3.2.1.1 材料的培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)取樣
            3.2.1.2 幼苗的脅迫處理
        3.2.2 白花泡桐DNA的提取(CTAB法)和檢測(cè)
            3.2.2.1 白花泡桐DNA的提取
            3.2.2.2 白花泡桐DNA的檢測(cè)
        3.2.3 白花泡桐RNA的提取和檢測(cè)
            3.2.3.1 白花泡桐RNA的提取
            3.2.3.2 白花泡桐RNA的檢測(cè)
        3.2.4 第一鏈cDNA的合成
        3.2.5 泡桐DREB基因保守序列的獲得
            3.2.5.1 設(shè)計(jì)合成引物
            3.2.5.2 PCR擴(kuò)增
        3.2.6 利用3'RACE、5'RACE克隆已知保守序列的3'端、5'端序列
            3.2.6.1 巢式PCR擴(kuò)增3'端序列
            3.2.6.2 巢式PCR擴(kuò)增5'端序列
        3.2.7 白花泡桐DREB基因全長(zhǎng)序列的獲得
        3.2.8 不同脅迫處理下白花泡桐DREB基因的表達(dá)分析
            3.2.8.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)引物設(shè)計(jì)
            3.2.8.2 引物的特異性檢測(cè)
            3.2.8.3 檢測(cè)引物二聚體
            3.2.8.4 繪制梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線DNA模板的制備
            3.2.8.5 不同逆境條件下目的基因表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 白花泡桐DREB基因序列的獲得
        4.1.1 白花泡桐基因組DNA、RNA檢測(cè)
        4.1.2 白花泡桐DREB保守序列的獲得
        4.1.3 DREB基因3,端、5,端序列的獲得
        4.1.4 DREB基因全長(zhǎng)序列
    4.2 白花泡桐DREB基因生物信息學(xué)分析
    4.3 不同脅迫處理下白花泡桐DREB基因的表達(dá)分析
        4.3.1 引物的特異性檢測(cè)
        4.3.2 引物二聚體檢測(cè)
        4.3.3 不同脅迫下目的基因表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量分析結(jié)果
5 結(jié)論與討論
    5.1 白花泡桐DREB基因的克隆
    5.2 白花泡桐DREB基因全長(zhǎng)序列的分析
    5.3 白花泡桐DREB基因的不同脅迫條件下表達(dá)分析
參考文獻(xiàn)
ABSTRACT



本文編號(hào)：3634200