漆樹（Toxicodendron vernicifluum（Stokes）F.A.Barkl.）是我國(guó)最古老的經(jīng)濟(jì)樹種之一,從其樹皮割取的生漆是優(yōu)良的天然涂料。由于氣候水熱條件限制和利用過(guò)度、保護(hù)不足,致使我國(guó)的漆樹資源和生漆產(chǎn)量在不斷減少。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（Glutathione Stransferases,GSTs,E.C.2.5.1.18）廣泛存在于細(xì)胞質(zhì)中,與植物抗逆性密切相關(guān),在清除生物或非生物脅迫產(chǎn)生的氧化損傷中起著重要作用,所以研究漆樹谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶對(duì)揭示漆樹抗逆機(jī)理具有非常重要的意義。本研究以漆樹主栽品種‘大紅袍’為試驗(yàn)材料,以漆樹谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶為研究對(duì)象,在漆樹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上,初步篩選出38條GSTs基因,對(duì)其序列進(jìn)行了分析,并對(duì)其中Lambda GST基因進(jìn)行克隆、表達(dá)及其功能的研究,主要結(jié)果如下:1.漆樹GST基因家族分為φ（Phi,F）、τ（Tau,U）、θ（Theta,T）、ζ（Zeta,Z）、λ（Lambda,L）、脫氫抗壞血酸還原酶（Dehydroascorbatereductase,DHAR）6個(gè)亞類;漆樹Tv GSTs基因序列的核苷酸長(zhǎng)度... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文22如表2-4所示，TvGSTZ1可能為細(xì)胞膜組成成分，TvDHAR1可能為葉綠體基質(zhì)、葉綠體包膜、類囊體膜組織的組成成分，其余TvGSTs基因GO功能注釋結(jié)果細(xì)胞學(xué)組件均為細(xì)胞質(zhì)。谷胱甘肽代謝過(guò)程為所有TvGSTs基因的生物學(xué)途徑；Tau（U）亞類TvGSTs基因具有毒素分解代謝的生物學(xué)途徑；Zeta（Z）亞類TvGSTs基因具有芳香族氨基酸家族代謝的生物學(xué)途徑；Lambda（L）亞類TvGSTs基因具有蛋白質(zhì)谷胱甘肽化的生物學(xué)途徑；TvDHAR1基因生物學(xué)途徑較為復(fù)雜，具有毒素分解代謝、對(duì)細(xì)胞分裂素的反應(yīng)、對(duì)環(huán)戊烯酮的反應(yīng)及蛋白質(zhì)谷胱甘肽化等生物學(xué)途徑；TvDHAR1基因具有谷胱甘肽脫氫酶（抗壞血酸）活性生物學(xué)途徑。TvGSTU12推測(cè)具有裂解酶的分子功能，其余TvGSTs基因所編碼的蛋白均具有谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性；TvGSTF7和TvGSTF11所編碼的蛋白質(zhì)可能為靶向線粒體的蛋白質(zhì)；TvGSTU7和TvGSTU10所編碼的蛋白具有乳酰谷胱甘肽裂解酶活性；TvDHAR2、TvDHAR3、TvDHAR4、TvDHAR5、TvDHAR6、TvDHAR7均可能參與氧化還原過(guò)程。因此，不同亞類TvGSTs基因GO功能注釋在細(xì)胞學(xué)組件、生物學(xué)途徑及分子功能存在較大的差異。2.2.7漆樹GST基因表達(dá)分析注：L代表葉；R代表莖；S代表根Lforleaves;Rforstems;Sforroots圖2-3漆樹GST基因的表達(dá)模式ExpressionpatternsofGSTgenesinToxicodendronvernicifluum

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文32亮度比約為2:1。經(jīng)核酸濃度測(cè)定儀測(cè)定后OD260/OD280=1.887，說(shuō)明無(wú)蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的污染；OD260/OD230=2.135，表明無(wú)碳水化合物、鹽的影響�？蛇M(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。圖3-1漆樹幼苗總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.3-1AgarosegelelectrophoresisvalidationoftotalRNAfromT.vernicifluum3.3.2漆樹LambdaGST基因的克隆對(duì)漆樹轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序和基因功能注釋，獲得一種候選GST基因。利用NCBIORFFinder對(duì)其查找后發(fā)現(xiàn)，該序列包含1個(gè)完整的ORF，根據(jù)該基因的序列信息，設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物，擴(kuò)增并構(gòu)建克隆表達(dá)載體，PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度約為700bp，電泳結(jié)果如圖3-2和圖3-3所示。經(jīng)測(cè)序得到漆樹GST基因的cDNA序列大小為1259bp，包含漆樹GST基因完整的ORF序列，大小為711bp，將其命名為TvGST7（GenBank登錄號(hào):MK956145）。TvGST7基因cDNA的核苷酸序列及對(duì)應(yīng)氨基酸序列如圖3-4所示。圖3-2PCR擴(kuò)增結(jié)果圖圖3-3TvGST7基因的菌落PCRFig.3-2PCRamplificationresultofTvGST7geneFig.3-3PCRidentificationoncolonyofTvGST7gene1.PCR全長(zhǎng)擴(kuò)增產(chǎn)物；M.DL2000DNAMaker2.陽(yáng)性克�。籑.DL2000DNAMakeramplificationproduct;M.DL2000DNAMakerPositiveclone;M.DL2000DNAMaker

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]火把梨谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆與功能分析[D]. 王光勇.昆明理工大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3561440