珙桐是我國特有的國家一級保護(hù)瀕危植物,具有很高的學(xué)術(shù)價值和觀賞價值。本研究以珙桐種子為研究對象,通過比較不同的蛋白提取方案,蛋白質(zhì)含量測定,以及去高豐度蛋白方案,確定了珙桐種子全蛋白提取方法,利用i TRAQ技術(shù)比較了種子在不同層積時期蛋白組學(xué)的變化。主要研究結(jié)果如下:（1）對8種全蛋白提取方案,采用相同上樣量,通過SDS-PAGE單向電泳,得到電泳條帶較多、蛋白質(zhì)組分完全且各組分量均勻的方案,即無沉淀分餾法。（2）同一層積時間段珙桐種子子葉的蛋白含量要比胚軸的少;在不同層積時期,珙桐種子胚軸中蛋白質(zhì)含量隨著層積時間的增加而減少。（3）由于大量的高豐度蛋白出現(xiàn)在電泳凝膠上,影響對低豐度蛋白的檢測。通過去高豐度蛋白法的研究發(fā)現(xiàn),以4%的體積比例在蛋白提取液中加入PEG6000粉末來沉淀高豐度蛋白的方案要比5%和6%的效果好,且當(dāng)PEG的濃度12%的時候效果最佳。（4）運用i TRAQ技術(shù)共鑒定珙桐種子蛋白質(zhì)867種,對層積前、濕砂層積8個月和13個月的珙桐種子蛋白表達(dá)譜進(jìn)行兩兩相比,鑒定出差異表達(dá)蛋白質(zhì)共計682種,其中差異倍數(shù)達(dá)到2倍的蛋白共300種,占到所鑒定蛋白總數(shù)的44%;在30... 

【文章來源】：湖北民族大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

去高豐度蛋白的實驗流程

圖 3.1 珙桐的果實與種子Fig. 3.1 The fruits and seeds of Davidia involucrata取蛋白方法的比較質(zhì)的提取方法的不同，所提取的樣品提取液的總蛋白含量也是用不同方案提取珙桐種子子葉蛋白質(zhì)的含量。 可看出，方案一提取的的總蛋白是最高的，而方案五所提取的蛋取的珙桐種子子葉總蛋白的時候，TCA 沉淀法得到的蛋白含量的 0.3 倍，但是高豐度蛋白太多，會影響到接下來的分析。通過酸緩沖液提取的方法的結(jié)果，要比其他方案的蛋白含量要少，全，各組分的量也是參差不齊、不均勻。

圖 3.2 用不同方案提取珙桐種子子葉蛋白質(zhì)的含量比較mparison of extraction content of its seed cotyledon proteins different提取植物總蛋白的方法上，可以用 SDS-PAGE 電泳鑒定分析，取液的組分。圖 3.3 即為方案一到方案八所提取的樣品提取電泳而獲得的凝膠圖像。從左到右的泳道的順序為 TCA 沉淀法、 1)、TCA-丙酮沉淀法 (樣 2)、無沉淀分餾法 (樣 1)、無沉淀分餾法甲醇\醋酸銨沉淀法、全蛋白提取液提取法、磷酸緩沖液提取法、萃取甲醇\醋酸銨沉淀改良法。ford 法測定的蛋白質(zhì)濃度，雖然價格比較便宜，檢測速度很快，白提取液提取法是為提取各種植物組織的全蛋白樣品，而最為常是 TCA-丙酮沉淀法。從圖中可以看出，方案一的高豐度蛋白太TCA-丙酮沉淀法的 2 個樣品、無沉淀分餾法的 2 個樣品和苯酚萃法所提取的共 5 個樣品的蛋白含量相差不大，通過電泳實驗和結(jié)

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本文編號：3499119