植原體（phytoplasma）是一種沒(méi)有細(xì)胞壁的植物病原細(xì)菌,寄主范圍十分廣泛,侵染多種果樹(shù)、林木和花卉植物。植原體目前尚無(wú)法在體外培養(yǎng)導(dǎo)致其研究受到限制。植原體病害在我國(guó)發(fā)生很普遍,如山東、陜西、云南等地都有很多植原體病害的報(bào)道,而近年來(lái)江蘇地區(qū)卻鮮有這方面的研究。本研究對(duì)南京部分地區(qū)的疑似植原體病害進(jìn)行了檢測(cè)和鑒定,對(duì)其中導(dǎo)致構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病的植原體進(jìn)行了較詳細(xì)的研究,包括植原體對(duì)寄主的抗氧化相關(guān)酶的影響、致病相關(guān)的TENGU基因、抗原膜蛋白的表達(dá)、分泌系統(tǒng)等,為進(jìn)一步了解植原體與寄主的相互作用,從分子水平揭示植原體的致病機(jī)理提供重要依據(jù)。本研究首次發(fā)現(xiàn)16SrI組植原體侵染構(gòu)樹(shù)造成構(gòu)樹(shù)葉片黃化、卷葉、畸形等癥狀,植原體侵染造成的桑樹(shù)白化、凌霄白化、三角槭黃化病也是國(guó)內(nèi)首次報(bào)道。主要研究結(jié)果如下:（1）構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病等植原體的鑒定:用植原體16SrDNA、核糖體蛋白基因（rp）和轉(zhuǎn)錄延伸因子基因（tuf’）的通用引物對(duì)疑似植原體感染的構(gòu)樹(shù)總DNA進(jìn)行直接PCR和巢式PCR擴(kuò)增并測(cè)序驗(yàn)證。結(jié)果表明,構(gòu)樹(shù)葉片黃化卷葉癥狀與植原體感染有關(guān),該植原體上述特定的基因序列與16S rl-B組中... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    一、植原體(phytoplasma)及植原體病害的研究進(jìn)展
        1. 植原體病害研究
        2. 植原體基因組
    二、植原體的分子生物學(xué)檢測(cè)方法
        1. PCR檢測(cè)
        2. 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        3. DNA條形碼技術(shù)
        4. 限制性片段多態(tài)性分析
        5. 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析
        6. 微陣列分析
    三、植原體的分類(lèi)
        1. 植原體的分類(lèi)學(xué)研究歷史
        2. 植原體的分類(lèi)
    四、植原體的致病因子及分泌系統(tǒng)
        4.1 植原體的毒力因子TENGU
        4.2 植原體的抗原膜蛋白(Amp)
        4.3 植原體的sec分泌系統(tǒng)
    五、本研究的主要內(nèi)容、目的及意義
    參考文獻(xiàn)
第一章 南京地區(qū)幾種植原體的檢測(cè)與鑒定
    第一節(jié) 構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病植原體的檢測(cè)與鑒定
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料與主要試劑
            1.2 患病棗樹(shù)、患病構(gòu)樹(shù)和健康構(gòu)樹(shù)總DNA提取
            1.3 引物的合成
            1.4 直接PCR與巢式PCR
            1.5 PCR產(chǎn)物的純化與克隆
            1.6 陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子的獲取
            1.7 目的片段的測(cè)序與同源性比較
            1.8 虛擬RFLP分析
            1.9 16S rDNA,rp,tuf基因的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析
        2 結(jié)果分析
            2.1 構(gòu)樹(shù)感染植原體后的癥狀
            2.2 構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病植原體16S rDNA、rp、tuf secY基因的PCR擴(kuò)增
            2.3 構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病植原體的16S rDNA,rp,tuf等基因的同源性分析
            2.4 基于構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病植原體16S rDNA、rp以及tuf基因的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析
        3 小結(jié)與討論
    第二節(jié) 三角槭黃化病等幾種植原體的16S rDNA的檢測(cè)與分類(lèi)
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料與主要試劑
            1.2 患病及健康植株總DNA的提取
            1.3 引物合成
            1.4 直接PCR與巢式PCR
            1.5 PCR產(chǎn)物回收與克隆
            1.6 目的片段的測(cè)序與序列同源性比較
            1.7 16S rDNA的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 感病植株的癥狀
            2.2 感病植株中植原體16S rDNA的PCR擴(kuò)增
            2.3 感病植株中植原體16S rDNA的序列同源性比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析
        3 小結(jié)與討論
    本章小結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
第二章 構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病植原體TENGU毒力因子的初步研究
    前言
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料及主要試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 TENGU基因的擴(kuò)增
        2.2 TENGU基因的克隆及序列分析
        2.3 TENGU基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的獲得
        2.5 轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
    3 小結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病植原體sec分泌系統(tǒng)3個(gè)亞基的克隆及其蛋白特性的分析
    前言
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 菌株與質(zhì)粒
        1.3 構(gòu)樹(shù)DNA的提取
        1.4 sec分泌系統(tǒng)3個(gè)亞基基因的PCR擴(kuò)增
        1.5 pMD 19-T-sec重組載體的構(gòu)建
        1.6 測(cè)序及同源性比對(duì)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 secA、secY和secE基因序列測(cè)定及分析
        2.2 secA、secY和secE的生物信息學(xué)分析
    3 小結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 構(gòu)樹(shù)黃化卷葉病植原體抗原膜蛋白(Amp)的克隆及外源表達(dá)
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 植原體抗原膜蛋白Amp基因的擴(kuò)增與質(zhì)粒的提取
        2.2 重組表達(dá)載體pET-28a(+)-Amp的驗(yàn)證
        2.3 Amp蛋白的表達(dá)及純化
    3 小結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
第五章 感染植原體的構(gòu)樹(shù)的抗氧化相關(guān)酶活的變化
    前言
    1. 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 結(jié)果與分析
        2.1 多酚氧化酶(PPO)活性
        2.2 過(guò)氧化物酶(POD)活性
        2.3 過(guò)氧化氫酶(CAT)活性
        2.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性
        2.5 丙二醛(MDA)含量
    3. 小結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
    一、本文獲得的主要結(jié)果
    二、本文的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    三、尚待解決的問(wèn)題
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植原體病害研究進(jìn)展[J]. 范國(guó)權(quán),韓樹(shù)鑫,白艷菊,高艷玲,張威,張抒,申宇,劉凱,喻江.  黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(11)
[2]植原體病害的傳播、流行和防治研究進(jìn)展[J]. 耿顯勝,舒金平,王浩杰,張威.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2015(25)
[3]環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在病原菌檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 劉芳,黃靜敏,何永盛,李傳禮.  檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊. 2013(06)
[4]植原體免疫主導(dǎo)膜蛋白Imp基因原核表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)[J]. 柴化建,趙海泉,張麗君,羅煥亮.  生物技術(shù)通報(bào). 2012(06)
[5]細(xì)菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J]. 李俊,俞盈,王豪舉.  微生物學(xué)報(bào). 2011(03)
[6]細(xì)菌的IV型分泌系統(tǒng)[J]. 趙巖,李明,胡福泉.  生命的化學(xué). 2011(01)
[7]桑樹(shù)生態(tài)產(chǎn)業(yè)與蠶絲業(yè)的發(fā)展[J]. 秦儉,何寧佳,黃先智,向仲懷.  蠶業(yè)科學(xué). 2010(06)
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[9]桑樹(shù)萎縮病的防治[J]. 王太興.  農(nóng)技服務(wù). 2009(07)
[10]根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及保存方法研究[J]. 魏琦超,暢麗萍.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(14)

博士論文
[1]西北地區(qū)常見(jiàn)植物植原體病害分子鑒定及株系多樣性研究[D]. 李正男.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015

碩士論文
[1]桑樹(shù)黃化型萎縮病植原體致病相關(guān)蛋白基因的克隆及致病性分析[D]. 盧寶云.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]植原體免疫膜蛋白Imp的原核表達(dá)及多克隆抗體制備[D]. 柴化建.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]檳榔黃化病植株生理生化指標(biāo)比較分析[D]. 陶明福.海南大學(xué) 2010
[4]叢枝病植原體在泡桐體內(nèi)分布特點(diǎn)和周年變化規(guī)律的研究[D]. 介大委.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[5]泡桐叢枝植原體中國(guó)株系的分子鑒定及免疫膜蛋白基因表達(dá)研究[D]. 史英姿.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007
[6]國(guó)槐分類(lèi)學(xué)與繁殖特性研究[D]. 趙燕.山東師范大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3487068