越南槐（Sophora tonkinensis Gapnep）別名廣豆根、苦豆根、山豆根、柔枝槐,是豆科多年生灌木植物,主要藥效成分是生物堿,具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,廣西是越南槐的主要產(chǎn)區(qū),目前越南槐的研究主要集中在藥材鑒別和藥理作用方面,對(duì)廣西、貴州、云南等地越南槐種質(zhì)資源遺傳多樣性缺乏系統(tǒng)性研究,導(dǎo)致對(duì)越南槐保育策略的選擇存在盲目性。本研究以越南槐的葉片為材料,利用cpDNA（葉綠體基因組）分子標(biāo)記及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP）技術(shù),對(duì)不同產(chǎn)地的越南槐進(jìn)行遺傳多樣性分析,以期為越南槐親緣關(guān)系研究提供分子生物學(xué)依據(jù),為越南槐遺傳保育奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1、利用3種略有不同的DNA提取方法分別提取越南槐樣品DNA，對(duì)比獲得的DNA樣品質(zhì)量,結(jié)果表明利用樣品預(yù)處理法提取的越南槐基因組DNA效果最好。2、篩選了 5對(duì)引物用于48份材料進(jìn)行不同cpDNA標(biāo)記的擴(kuò)增。48份材料中擴(kuò)增出cpDNA序列,變異位點(diǎn)為38個(gè)堿基,轉(zhuǎn)換率14.01%,堿基顛換率21.02%，說(shuō)明48份材料之間變異較大。通過(guò)對(duì)單倍型間分化指數(shù)Hd=0.826±0.040可將整個(gè)序列分為18個(gè)單倍型,從單倍型網(wǎng)絡(luò)圖中... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１瓊脂糖凝膠的電泳檢測(cè)??Ｆｉｇ．?３－１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＡＧＥ?（ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）??

ＯＤ２６０／２８０在正常范圍，ＯＤ２６０／２３０接近２．０，濃度在１００－３００ｎｇ／ｍＬ，三者相比樣品預(yù)??處理法提取效果最佳。??用１°／。的瓊脂糖凝膠上樣ｌｍＬ檢測(cè)，部分樣本跑膠檢測(cè)如圖３－１所示，檢測(cè)結(jié)果表??明：酚－氯仿－異戊醇提取法提取的ＤＮＡ難以分辨主帶，原因可能為提取過(guò)程中酚－氯仿－??異戊醇（２５：２４：１?）未將蛋白質(zhì)除盡，以及后續(xù)核算中含有殘留的酚類(lèi)物質(zhì)過(guò)多；高ＰＶＰ??和Ｐ－巰基乙醇提取法結(jié)果顯示能提取條帶單一的基因組ＤＮＡ，提取越南槐ＤＮＡ產(chǎn)量較??高，但仍存在多糖；樣品預(yù)處理法提取的ＤＮＡ電泳結(jié)果顯示條帶清晰，單一，亮度高，??提取效果最好。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?Ｓ?＾???圖３－１瓊脂糖凝膠的電泳檢測(cè)??Ｆｉｇ．?３－１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＡＧＥ?（ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）??注：Ｍ：?ＤＬ１００００ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１－３號(hào)泳道為酚－氯仿－異戊醇提取法獲得的越南槐ＤＮＡ；?４－６號(hào)??泳道為高ＰＶＰ和Ｐ－巰基乙醇提取法獲得的ＤＮＡ：?７－９號(hào)泳道為樣品預(yù)處理法獲得的ＤＮＡ。??Ｍ：?ＤＬ１００００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｌ－３１ａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｐｈｅｎｏｌ－ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｉｓｏａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ??ｍｅｔｈｏｄ；?４－６?ｌａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｈｉｇｈ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＰＶＰ?ａｎｄ?ｐ－ＭＥ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｍｅｔｈｏｄ；?７－９１ａｎｅ

ＯＤ２６０／２８０在正常范圍，ＯＤ２６０／２３０接近２．０，濃度在１００－３００ｎｇ／ｍＬ，三者相比樣品預(yù)??處理法提取效果最佳。??用１°／。的瓊脂糖凝膠上樣ｌｍＬ檢測(cè)，部分樣本跑膠檢測(cè)如圖３－１所示，檢測(cè)結(jié)果表??明：酚－氯仿－異戊醇提取法提取的ＤＮＡ難以分辨主帶，原因可能為提取過(guò)程中酚－氯仿－??異戊醇（２５：２４：１?）未將蛋白質(zhì)除盡，以及后續(xù)核算中含有殘留的酚類(lèi)物質(zhì)過(guò)多；高ＰＶＰ??和Ｐ－巰基乙醇提取法結(jié)果顯示能提取條帶單一的基因組ＤＮＡ，提取越南槐ＤＮＡ產(chǎn)量較??高，但仍存在多糖；樣品預(yù)處理法提取的ＤＮＡ電泳結(jié)果顯示條帶清晰，單一，亮度高，??提取效果最好。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?Ｓ?＾???圖３－１瓊脂糖凝膠的電泳檢測(cè)??Ｆｉｇ．?３－１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＡＧＥ?（ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）??注：Ｍ：?ＤＬ１００００ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１－３號(hào)泳道為酚－氯仿－異戊醇提取法獲得的越南槐ＤＮＡ；?４－６號(hào)??泳道為高ＰＶＰ和Ｐ－巰基乙醇提取法獲得的ＤＮＡ：?７－９號(hào)泳道為樣品預(yù)處理法獲得的ＤＮＡ。??Ｍ：?ＤＬ１００００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｌ－３１ａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｐｈｅｎｏｌ－ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｉｓｏａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ??ｍｅｔｈｏｄ；?４－６?ｌａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｈｉｇｈ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＰＶＰ?ａｎｄ?ｐ－ＭＥ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｍｅｔｈｏｄ；?７－９１ａｎｅ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]柿屬植物cpDNA分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)及遺傳變異研究[J]. 傅建敏,索玉靜,張嘉嘉,譚曉風(fēng).  中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(06)
[2]黑藻cpDNA分子標(biāo)記的篩選及其遺傳多樣性的初步研究[J]. 付春霖,戴小康,李小燕,劉星.  植物科學(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)
[3]基于煙草葉綠體基因組和線粒體基因組SSR標(biāo)記的煙屬植物遺傳多樣性分析[J]. 曾建敏,陳學(xué)軍,吳興富,焦芳嬋,肖炳光,李永平,童治軍.  中國(guó)煙草學(xué)報(bào). 2016(04)
[4]InDel標(biāo)記的研究和應(yīng)用進(jìn)展[J]. 楊潔,赫佳,王丹碧,施恩,楊文宇,耿其芳,王中生.  生物多樣性. 2016(02)
[5]芒屬植物葉綠體InDel標(biāo)記的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用[J]. 薛宏,易自力,肖亮,丁力,彭思佳,蔣建雄.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2015(07)
[6]9個(gè)野生中國(guó)櫻桃群體葉綠體DNA trnQ-rps16序列變異及其遺傳結(jié)構(gòu)分析[J]. 陳濤,王小蓉,羅華,王春濤,張家志,羅明敏.  遺傳. 2012(11)
[7]梨屬葉綠體非編碼區(qū)trnL-trnF和accD-psaI特征及其在系統(tǒng)發(fā)育研究中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 胡春云,鄭小艷,滕元文.  園藝學(xué)報(bào). 2011(12)
[8]山豆根及其常見(jiàn)混淆品的鑒別[J]. 張?jiān)品?  海峽藥學(xué). 2011(12)
[9]遺傳標(biāo)記的類(lèi)型、作用與水稻遺傳標(biāo)記的研究現(xiàn)狀[J]. 陶紅劍,林璐,蘇巖,黃大年.  中國(guó)稻米. 2011(05)
[10]廣西廣豆根藥材基源植物資源調(diào)查研究[J]. 周雅琴,譚小明,吳慶華,凌征柱,余麗瑩.  廣西科學(xué). 2010(03)

博士論文
[1]中國(guó)北方野生杜梨的遺傳多樣性和譜系地理研究[D]. 宗宇.浙江大學(xué) 2014
[2]中國(guó)豆梨與川梨的遺傳多樣性和群體遺傳結(jié)構(gòu)研究[D]. 劉晶.浙江大學(xué) 2013

碩士論文
[1]基于SSR標(biāo)記及ITS、cpDNA序列的刺梨遺傳多樣性分析[D]. 張懷山.貴州大學(xué) 2017
[2]基于ITS和cpDNA分子標(biāo)記的江西建蘭野生居群遺傳結(jié)構(gòu)研究[D]. 李亞.南昌大學(xué) 2013
[3]基于ITS和cpDNA江西蕙蘭野生居群遺傳結(jié)構(gòu)研究[D]. 龔黃莎.南昌大學(xué) 2013
[4]鹿蹄草遺傳多樣性的AFLP與SRAP分析[D]. 王威威.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]基于cpDNA單倍型的銀杏群體遺傳與譜系分析[D]. 曾真.浙江大學(xué) 2008
[6]湖北海棠SRAP體系建立及其遺傳多樣性研究[D]. 郭大勇.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[7]柿屬植物DNA提取純化檢測(cè)技術(shù)體系的建立[D]. 易慶平.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3405287