鋅指蛋白（ZFP,Zinc Finger Proteins）是植物一大類重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,參與調(diào)控一些重要的生理過(guò)程,如:形態(tài)建成、花粉發(fā)育、脅迫應(yīng)答、胚胎發(fā)育等[1]。在前期研究中發(fā)現(xiàn)剛毛檉柳ThZFP基因可能是耐鹽基因,因此本研究進(jìn)一步對(duì)ThZFP基因的耐鹽功能進(jìn)行了研究,并對(duì)其耐鹽調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了初步的分析。本研究從抗旱耐鹽的木本植物剛毛檉柳轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中鑒定了一條鹽脅迫誘導(dǎo)表達(dá)的鋅指蛋白（salt-induciblezincfinger）基因,命名為ThSZF3。ThSZF3基因全長(zhǎng)1176bp,發(fā)現(xiàn)該基因編碼391個(gè)氨基酸,分子量為97.26 kDa,理論等電點(diǎn)為5.00。亞細(xì)胞定位結(jié)果表明ThSZF3蛋白在細(xì)胞核中表達(dá)。構(gòu)建了ThSZF3基因過(guò)表達(dá)載體pROKII-ThSZF3及RNAi載體pFGC5941-ThSZF3,將其與空pROKII載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)化到剛毛檉柳中,分別獲得過(guò)表達(dá)（OE）、抑制表達(dá)（RNAi）及對(duì)照（CON）剛毛檉柳轉(zhuǎn)基因植株并對(duì)轉(zhuǎn)基因剛毛檉柳進(jìn)行NaCl脅迫。分析比較了三種轉(zhuǎn)基因剛毛檉柳中的DAB、NBT及Evans Blue染色以及POD、SOD、PRO... 

【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＰＣＲ擴(kuò)增ｍＳＺＦＪ基因??送至測(cè)序，測(cè)序結(jié)果４轉(zhuǎn)泌組數(shù)據(jù)序列比對(duì)完全相同，說(shuō)明７７６２巧基因成功克??’

利用ＮＣＢＩ對(duì)７７６ＺＷ編碼的氨基酸進(jìn)行保守區(qū)域分析，發(fā)現(xiàn)有典型的ｚｆ－ＣＣＣＨ??結(jié)構(gòu)。結(jié)合ＥｘＰＡＳｙ－ＰＲＯＳＩＴＥ分析顯示，ＴｈＳＺＦ３蛋白序列的Ｎ－端含有３個(gè)保守的ＺＦＰ??結(jié)構(gòu)域，為典型的ＣＣＣＨ類鋅指蛋白，如圖２－４所示：??｜?５？?１（９?１＾０?２＾＊?２＾＊?３？＊?３｜？?３Ｊ１??Ｑｕｅｒｙ?■■ＢＢＭｙ?ｌｌｌｌｌｉｌｌｌｌ??Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｈｉｔｓ??Ｓｕｐｅｒ?ｆａｍｉｌｉｅｓ?ｋ＜－ｔｃｃ？｜??１?１００?２００?３００?４００?５００?６００?７００?８００?９００?１０００??ｒＵｌｅｆ：?１．．．＂—｜＿＿，．＾．．；．．＊．｜．．卜—．｜．．｜．叫．４．二?Ｈ．．．．．．｜??ＬＪ?Ｓ?Ｅ?Ｒ?Ｓ?Ｅ?Ｑ?１?勸?ｗｒ你■＞．似?（?３?９?１?３?３?）??ｗｗｗ＾??圖２－４剛毛檉柳７７６ＺＦＪ基因的保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)??２．３．２３剛毛檉柳７７ＡＺＦＪ基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析??根據(jù)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)Ｔ／６ＺＦＪ二級(jí)結(jié)構(gòu)由無(wú)規(guī)則卷曲，ａ－螺旋和（３－折疊??組成。其中以無(wú)規(guī)則卷曲為主，占９１．３％?（約３５７個(gè)氨基酸），其次是ａ－螺旋占５．１２％??（約２０個(gè)氨基酸）

５０?１００?１５０?２００?２５０?３００?３５０??Ｐｏｓｉｔｉｏｎ??圖２－３剛毛檉柳ＴＨＳＺＦ３蛋白的疏水結(jié)構(gòu)分析??２．３．２．２剛毛檉柳７７ＫＳＺＦＪ基因保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)??利用ＮＣＢＩ對(duì)７７６ＺＷ編碼的氨基酸進(jìn)行保守區(qū)域分析，發(fā)現(xiàn)有典型的ｚｆ－ＣＣＣＨ??結(jié)構(gòu)。結(jié)合ＥｘＰＡＳｙ－ＰＲＯＳＩＴＥ分析顯示，ＴｈＳＺＦ３蛋白序列的Ｎ－端含有３個(gè)保守的ＺＦＰ??結(jié)構(gòu)域，為典型的ＣＣＣＨ類鋅指蛋白，如圖２－４所示：??｜?５？?１（９?１＾０?２＾＊?２＾＊?３？＊?３｜？?３Ｊ１??Ｑｕｅｒｙ?■■ＢＢＭｙ?ｌｌｌｌｌｉｌｌｌｌ??Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｈｉｔｓ??Ｓｕｐｅｒ?ｆａｍｉｌｉｅｓ?ｋ＜－ｔｃｃ？｜??１?１００?２００?３００?４００?５００?６００?７００?８００?９００?１０００??ｒＵｌｅｆ：?１．．．＂—｜＿＿，．＾．．；．．＊．｜．．卜—．｜．．｜．叫．４．二?Ｈ．．．．．．｜??ＬＪ?Ｓ?Ｅ?Ｒ?Ｓ?Ｅ?Ｑ?１?勸?ｗｒ你■＞．似?（?３?９?１?３?３?）??ｗｗｗ＾??圖２－４剛毛檉柳７７６ＺＦＪ基因的保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)??２．３．２３剛毛檉柳７７ＡＺＦＪ基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析??根據(jù)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)Ｔ／６ＺＦＪ二級(jí)結(jié)構(gòu)由無(wú)規(guī)則卷曲，ａ－螺旋和（３－折疊??組成。其中以無(wú)規(guī)則卷曲為主，占９１．３％?（約３５７個(gè)氨基酸），其次是ａ－螺旋占５．１２％??（約２０個(gè)氨基酸）


本文編號(hào)：3114279