發(fā)布時間：2021-03-20 11:29

　　WRKY家族基因是近些年來研究較為廣泛的一類植物轉(zhuǎn)錄因子,它在高等植物中存在較廣,在低等植物中很少發(fā)現(xiàn)。WRKY家族成員不僅可以參與植物的多種生物學過程,如代謝調(diào)控、形態(tài)建成、種子萌發(fā)等,在生物和非生物脅迫條件下也會不同程度被誘導,表明了在植物防衛(wèi)反應中WRKY蛋白扮演著不可或缺的角色。本研究克隆白樺WRKY家族基因及其啟動子,研究其表達特性,篩選和抗逆性及材性相關的WRKY家族成員,進行功能研究,為林木分子生物學提供基礎理論,為培育速生、優(yōu)質(zhì)、高抗白樺新品種提供材料。本研究在前期構(gòu)建的白樺轉(zhuǎn)錄組中查找到131條WRKY基因,利用NCBI網(wǎng)站中的blastx程序進行比對分析,最終確定37條具有完整開放讀碼框（ORF）的白樺WRKY基因序列,利用PCR技術(shù)進行擴增,成功克隆得到20條白樺WRKY基因,并對其進行了生物信息學分析。結(jié)果表明它們都含有高度保守的WRKY氨基酸結(jié)構(gòu)域,并且很多都與擬南芥中的AtWRKY遺傳進化關系較近。利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究了白樺WRKY家族基因在白樺不同組織及不同非生物脅迫下不同時間點的基因表達模式,結(jié)果表明這些基因在不同組織中的表達是具有特異性的,在... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１白樺ＷＲＫＹ家族基因保守區(qū)預測??表２－６白樺ＷＲＫＹ家族基因蛋白質(zhì)性質(zhì)??

?東北林業(yè)大學碩士學位論文???２．３．２．４白樺ＷＲＫＹ家族基因系統(tǒng)進化分析??此外，還對２０條白樺辦基因推導的蛋白序列和７１條擬南芥Ａ奶況ｒ基因??的蛋白序列進行了系統(tǒng)進化樹分析（圖２－３）。結(jié)果表明你與的遺傳??進化關系較近；卵／股尺｝３５與＾４／哪尤７￥４的遺傳進化關系較近；你／膽尤７２５與??／１／Ｗ７？ＡＴ５７的遺傳進化關系較近；辦／＾ｉＱ７２與的遺傳進化關系較近；??％脈尺與乂爾尺削的遺傳進化關系較近；辦脈燈２５與Ｊ戯燈２７的遺傳進化??關系較近；�。A？尤７２５與淪的遺傳進化關系較近；辦／階？尺｝＾與淪奶？ＫＦ（５５的??遺傳進化關系較近；辦／階？尤７（５與Ａ階？／０７５的遺傳進化關系較近。??＿＿??ＡｔＷＲＫＹ７４?＾?Ｈ?Ｌ—ＣＺＺＩ—：——ＡｔＷＲＫＹ５７??°?５?°??圖２－３白樺ＷＲＫＹ家族基因系統(tǒng)進化分析??－３０－??

２白樺ＷＲＫＹ家族基因克隆及表達分析??２．３．３白樺ＷＲＫＹ家族基因響應非生物脅迫研究??以未脅迫處理的野生型白樺為對照，對用２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣｌ和３００?ｍｍｏｌ／Ｌ甘露醇??（Ｍａｎｎｉｔｏｌ）分別脅迫處理６?ｈ、１２?ｈ、２４?ｈ和４８?ｈ四個不同時間點的２０條白樺財夂Ｆ??基因的表達量進行分析，結(jié)果見圖２－５。結(jié)果顯示在２０條白樺陳火Ｆ基因中，只有??辦／的？尺汾基因在兩種脅迫的不同時間點均上調(diào)表達，其余１９條白樺基因在各??個時間點均下調(diào)表達。在２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣｌ的脅迫處理中，２０條白樺ＷＲＫＹ家族基因??隨著脅迫處理時間的增長，其基因表達量變化的總體表達趨勢是先下降后又有所恢復，??在脅迫處理２４?ｈ左右達到其表達量的最低值。在３００?ｍｍｏｌ／Ｌ?Ｍａｎｎｉｔｏｌ的脅迫處理中，??２０條白樺ＷＲＫＹ家族基因隨著脅迫處理時間的增長，其基因表達量變化的總體表達趨??勢表現(xiàn)為有所恢復而后繼續(xù)下降，在脅迫處理６?ｈ左右表達量最低。除此之外還可以看??出，基因在兩種脅迫處理的各個時間點表達量相對穩(wěn)定，差異不大，且在２０??條白樺基因中下調(diào)表達最為明顯。??圖２－４脅迫處理后白樺材料ＲＮＡ提収檢測電泳圖??注：Ａ：未處理野生型白樺ＲＮＡ；?Ｂ：?２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣ丨脅迫處理６?ｈ后白樺ＲＮＡ；?Ｃ：?２００?ｍｍｏｌ／Ｌ??ＮａＣｌ?脅迫處理?１２?ｈ?后白樺?ＲＮＡ；?Ｄ：?２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣｌ?脅迫處理?２４?ｈ?后白樺?ＲＮＡ；?Ｅ：?２００?ｍ．ｍｏ．ｌ／Ｌ??ＮａＣ丨脅迫處理４８?ｈ后白樺ＲＮＡ；?Ｆ：?３００?ｍｍｏｌ／Ｌ?Ｍａｎｎｉｔｏ丨脅迫處理６?ｈ后白樺ＲＮＡ；

【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究進展[J]. 李岢,周春江.  植物生理學報. 2014(09)
[2]次生誘導擬南芥的莖、下胚軸解剖結(jié)構(gòu)變化的初步研究[J]. 楊海峰,何麗君,王雷,明海軍,徐建華.  河北農(nóng)業(yè)大學學報. 2014(02)
[3]植物WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族基因抗病相關功能的研究進展[J]. 王磊,高曉清,朱苓華,周永力,黎志康.  植物遺傳資源學報. 2011(01)
[4]低溫脅迫對冬小麥恢復生長后植株細胞膜透性和丙二醛含量的影響[J]. 陳禹興,付連雙,王曉楠,李卓夫.  東北農(nóng)業(yè)大學學報. 2010(10)
[5]不同地理種源速生白樺化學組分[J]. 卞麗萍,岳金權(quán),張國珍,楊傳平.  東北林業(yè)大學學報. 2010(10)
[6]白樺半同胞子代生長及木材纖維性狀變異分析[J]. 穆懷志,劉桂豐,姜靜,李開隆,祝澤兵,劉振,滕文華,楊傳平.  東北林業(yè)大學學報. 2009(03)
[7]我國白樺育種研究概況[J]. 李天芳,姜靜,楊傳平,劉桂豐.  江蘇林業(yè)科技. 2008(02)
[8]白樺容器栽培試驗（Ⅱ）——循環(huán)潮水式灌溉栽培法的營養(yǎng)液研究[J]. 郁書君,汪天,金宗郁,李貞植.  北京林業(yè)大學學報. 2001(02)
[9]植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與調(diào)控作用[J]. 劉強,張貴友,陳受宜.  科學通報. 2000(14)
[10]膜脂過氧化對植物細胞的傷害[J]. 陳少裕.  植物生理學通訊. 1991(02)

博士論文
[1]小麥基因組中WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族基因鑒定、克隆和TaWRKY10基因的功能分析[D]. 王晨.華中科技大學 2013
[2]平榛WRKY轉(zhuǎn)錄因子的克隆與功能鑒定[D]. 趙天田.中國林業(yè)科學研究院 2012
[3]WRKY基因家族的進化及水稻W(wǎng)RKY基因表達譜的研究[D]. 吳坤陸.浙江大學 2005

碩士論文
[1]棉花WRKY轉(zhuǎn)錄因子GhWRKY39的分離及功能研究[D]. 史偉娜.山東農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]毛竹抗逆相關基因PeZFP和PeMYB基因的克隆及PeZFP基因功能驗證[D]. 楊麗.浙江農(nóng)林大學 2011
[3]轉(zhuǎn)基因白樺中外源基因整合表達穩(wěn)定性與遺傳變異分析[D]. 曾凡鎖.東北林業(yè)大學 2005



本文編號：3090926