近年?yáng)|北紅豆杉（Taxus cuspidata Sieb.et Zucc）遭受到了嚴(yán)重的人為破壞,自然種群數(shù)量銳減。了解東北紅豆杉自然種群的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)對(duì)于評(píng)價(jià)和保護(hù)東北紅豆杉的自然種群資源具有重要的理論價(jià)值和實(shí)踐意義。東北紅豆杉是第三紀(jì)孑遺植物,研究其譜系地理可以為推測(cè)種群遺傳多樣性的形成機(jī)制和物種遷移演化歷史提供依據(jù)。本研究選用三個(gè)父性遺傳的葉綠體DNA片段和一個(gè)母性遺傳線粒體DNA片段作為遺傳標(biāo)記,以采集東北紅豆杉中國(guó)分布范圍25個(gè)居群共231個(gè)個(gè)體為研究材料,分析其居群遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu),從而推測(cè)居群歷史動(dòng)態(tài),并為該物種的保護(hù)提供理論依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)東北紅豆杉居群具有較高的遺傳多樣性,聯(lián)合葉綠體序列分析得到14個(gè)葉綠體單倍型,總的葉綠體單倍型多態(tài)性（Hd）為0.86,總的核苷酸多態(tài)性（π）為2.5 × 10-4;線粒體基因片段只檢測(cè)出二種單倍型,單倍型多態(tài)性（Hd）為0.44,核苷酸多態(tài)性（i）為4.0 × 10-4。葉綠體數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示遺傳變異主要分布在居群內(nèi)（98.5%）,單倍型數(shù)據(jù)分析得到的遺傳分化系數(shù)GsT為0.10,與Nsr（0.09）相比沒有顯著差異說(shuō)明東... 

【文章來(lái)源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

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【部分圖文】：

圖１－２東北紅豆杉自然地理分布（摘自吳榜華，１９９５）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｎａｔｕｒａｌ?ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｚ?ｃｕｓｐｉｄａｔｅ?（Ｗｕ，?１９９５）??

?東北紅豆杉的譜系地理結(jié)構(gòu)研究所有提取的ＤＮＡ用超微量紫外分光光度計(jì)（ＮａｎｏＤｒｏｐ?８０００）測(cè)定ＯＤ２６０ＯＤ２８０的比值（當(dāng)Ａ２６０／Ａ２８０?＝?１＿８，表示ＤＮＡ提取純度較高，若Ａ２６０／Ａ２８０?＜?１．８表示總ＤＮＡ中有蛋白污染，而Ａ２６０／Ａ２８０?＞１．９，則樣品可能有ＲＮＡ污染），再適量ｌｋｂＤＮＡ?Ｌａｄｄｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ同時(shí)在１％瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳跑膠，凝膠成像（ＪＹ０４Ｓ－３Ｃ）拍照，結(jié)果如下：??

ｄ??圖２－３引物在東北紅豆杉中的ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果在瓊脂糖膠中的檢測(cè)??ａ：?＾７７／／－；？認(rèn)４引物的擴(kuò)增效果；ｂ：?引物的擴(kuò)增效果；??ｃ：?／＾Ｄ－＾７？ｒ引物的擴(kuò)增效果；ｄ：?ｍ必／４－５引物的擴(kuò)增效果??注：Ｍ代表Ｍａｒｋｅｒ?（Ｍａｒｋｅｒ?ＩＩ?），數(shù)字１－２４代表擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?２－３?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?３?ｃｐＤＮＡ?ａｎｄ?１?ｍｔＤＮＡ?ｐｒｉｍｅｒｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｔｈｉｓ?ｓｔｕｄｙ??ａ：?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｔｒｎＨ－ｐｓｂＡ?ｐｒｉｍｅｒ；?ｂ：?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?／ｒｗＬ－／＇ｐｒｉｍｅｒ；??ｃ：?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆｐｓｂＤ－ｔｒｎＴｐｒｉｍｅｒ；?ｄ：?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｉｎａｄ５／Ａ－５?ｐｒｉｍｅｒ??Ｎｏｔｅ：?Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｍａｒｋｅｒ?ＩＩ），?ｎｕｍｂｅｒ?１－２４：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ??２．１．２．４?ＰＣＲ產(chǎn)物測(cè)序??根據(jù)測(cè)序結(jié)果選擇了四對(duì)多態(tài)性好且具有穩(wěn)定可靠突變位點(diǎn)的引物，基于上ＰＣＲ反應(yīng)體系和程序，進(jìn)行批量擴(kuò)增，本研宄從采樣的２５個(gè)種群，從中選取了?２３個(gè)個(gè)體進(jìn)行批量擴(kuò)增，ＰＣＲ產(chǎn)物用０．８％瓊脂糖電泳檢測(cè)，然后用北京擎科新業(yè)物技術(shù)公司（ＴｓｉｎｇＫｅ，?Ｂｅｉｊｉｎｇ，?Ｃｈｉｎａ）的磁珠法進(jìn)行純化。實(shí)驗(yàn)流程如下：??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[5]天然東北紅豆杉枝中紫杉醇和三尖杉寧堿含量變化特征[J]. 常醉,周志強(qiáng),夏春梅,劉彤.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(02)
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