發(fā)布時(shí)間：2020-08-17 08:56

【摘要】：本研究通過(guò)對(duì)對(duì)照組自然生長(zhǎng)的橡膠樹(shù)紅根病病菌GP020菌株和進(jìn)行低濃度己唑醇脅迫12小時(shí)處理后的菌絲,使用酚抽提法,提取蛋白,并通過(guò)FASS方法進(jìn)行酶解及ITRAQ染料標(biāo)記,之后進(jìn)行Ph-RP液相分離及RPLC-MS液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用,并使用生物信息學(xué)軟件及數(shù)據(jù)庫(kù),分析所得到的肽段信息,并通過(guò)Uniprot及RNA-Sequecing數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行注釋和分析。通過(guò)iTRAQ技術(shù)的篩選和鑒定,對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量,共得到譜圖147663張,通過(guò)proteinpilot軟件進(jìn)行分析后,Unique匹配到的譜圖數(shù)量為49236張,共鑒定到31853個(gè)Unique肽段,3241個(gè)蛋白豐度差異倍數(shù)達(dá)到1.3倍以上,268個(gè)蛋白表達(dá)出現(xiàn)差異,通過(guò)KEGG信號(hào)通路分析,差異表達(dá)蛋白分布于146個(gè)信號(hào)通路中,其中上調(diào)表達(dá)蛋白121個(gè),下調(diào)表達(dá)蛋白147個(gè)。以CK為對(duì)照組,顯著富集的pathway通路分別是:能量代謝中的碳代謝、糖酵解/糖異生能力、二羧酸代謝、三羧酸循環(huán),氨基酸生物合成和核糖體代謝。說(shuō)明農(nóng)藥脅迫下橡膠樹(shù)紅根病菌發(fā)生了復(fù)雜的應(yīng)激反應(yīng)。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中,HIF-1、RIG-I-like receptor、MAPK、FoxO及NOD-like receptor等5個(gè)信號(hào)通道中有5蛋白表達(dá)上調(diào),與GO分析和COG分析一致。一個(gè)SGT1-like蛋白在受脅迫的橡膠樹(shù)紅根病病菌中表達(dá)明顯上調(diào)1.62倍,與之貫穿的蛋白質(zhì)組-轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合分析結(jié)果也印證了這一上調(diào)表達(dá)趨勢(shì),其上調(diào)表達(dá)推測(cè)是橡膠樹(shù)紅根病菌受到己唑醇脅迫后的耐藥性應(yīng)激反應(yīng),可能與橡膠樹(shù)紅根病菌對(duì)己唑醇的基礎(chǔ)耐藥性(basal fungicide tolerance)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S763.7
【圖文】：

圖１邋ｉｔｒａｑ原理示意圖逡逑Ｆｉｇ．邋１邋ｉｔｒａｑ邋Ｔｈｅｏｒｙ邋Ｓｋｅｔｃｈ邋Ｍａｐ逡逑圖１邋（圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)ｈｔｔｐ：／／胃．ｆｉｔｇｅｎｅ．邋ｃｏｍ／）過(guò)程是ｉＴＲＡＱ定量蛋白質(zhì)組逡逑學(xué)原理，該圖顯示了邋ｉＴＲＡＱ定量技術(shù)的基本原理及主要步驟，ｉＴＲＡＱ定量方法最多可逡逑Ｗ在一次串聯(lián)質(zhì)譜操作中同時(shí)比較八個(gè)樣品中的蛋白的相對(duì)含量，主要步驟如圖中所逡逑示，分別為蛋白提取、膜蛋白酶水解、Ｌ油ｅｌ標(biāo)記、樣品混合、化ｇｈ邋ｐＨ反相色譜預(yù)逡逑分離、液相串聯(lián)質(zhì)譜分析。在一級(jí)質(zhì)譜時(shí)，平衡基團(tuán)可Ｗ確保無(wú)論用哪種報(bào)告離子標(biāo)逡逑記膚段，都顯示為相同的質(zhì)荷比值。在二級(jí)質(zhì)譜時(shí)，平衡基團(tuán)發(fā)生中性丟失，而報(bào)告逡逑離子的強(qiáng)度則可Ｗ反映r藍(lán)蔚南嘍苑岫戎�。唾Z兇釹路轎徽牛停櫻停悠淄跡嶙晡義獻(xiàn)永胱又屎殺戎擔(dān)葑拔胱憂慷�。８个彩色峰表是G椋裕遙粒咽約戀模鋼直ǜ胬胱櫻義掀涓叨確直鶇砹死叨蔚南嘍院

本文編號(hào)：2795103