【摘要】：濕地松(Pinus elliottii)自上世紀(jì)30年代引種至今,已成為我國南方造林的主要樹種,然而滯后的良種繁育技術(shù)依舊制約其發(fā)展。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的高速發(fā)展,植物組織離體培養(yǎng)和體細(xì)胞胚胎胚發(fā)生技術(shù)具有繁殖快、周期短、高效、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn),為濕地松快繁提供有力的技術(shù)支撐。目前國內(nèi)外很多學(xué)者都做過這方面的研究并取得了成功,建立了胚胎發(fā)生和植株再生體系,然而在濕地松體胚技術(shù)中,目前還存在胚性誘導(dǎo)率低,增殖不穩(wěn)定等問題。本研究以濕地松未成熟合子胚為外植體,采用L9(3~4)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)和單因素試驗(yàn),研究了基本培養(yǎng)基(LP、DCR和LM),不同濃度植物生長調(diào)節(jié)激素2,4-D和6-BA的組合,不同接種方式對不同采集期的4個(gè)濕地松基因型濕地松體胚組織誘導(dǎo)和增殖的影響。試驗(yàn)初步建立了體胚誘導(dǎo)和增殖體系,篩選出最佳的胚性愈傷組織誘導(dǎo)和增殖的條件。同時(shí)試驗(yàn)對濕地松誘導(dǎo)出的愈傷組織進(jìn)行了顯微觀察以及內(nèi)源激素測定,從形態(tài)細(xì)胞學(xué)以及生理生化上,對胚性與非胚性愈傷組織做了區(qū)分。并利用碘-碘化鉀染色對濕地松胚性愈傷組織中早期原胚組織進(jìn)行觀察,揭示了早期原胚發(fā)育過程。結(jié)果表明:最適宜的采種時(shí)期為6月下旬到7月上旬,即合子胚處于發(fā)育的第1~4階段。參試的4個(gè)基因型的胚性愈傷組織誘導(dǎo)率有差異,基因型F-B、F-C、F-D最高胚性誘導(dǎo)率分別為13.33%、6.67%、13.33%,平均胚性誘導(dǎo)率分別為3.25%、4.33%、3.25%,但F-A僅在6月24日誘導(dǎo)出了2個(gè)胚性愈傷組織,平均誘導(dǎo)率僅為0.667%,最高胚性誘導(dǎo)率為6.67%,不適宜作為體胚誘導(dǎo)的材料�；九囵B(yǎng)基對胚性愈傷組織誘導(dǎo)率有極顯著差異,參試的各時(shí)期所有基因型僅在DCR培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出了胚性愈傷組織,并且DCR培養(yǎng)基上非胚性愈傷組織誘導(dǎo)率均比LP和LM培養(yǎng)基高,說明不論是濕地松的胚性還是非胚性愈傷組織的誘導(dǎo),DCR培養(yǎng)基為最適宜的基本培養(yǎng)基。在9種培養(yǎng)基組合中,愈傷組織誘導(dǎo)率最高的為:DCR+2.2 mg/L2,4-D+2.2mg/L6-BA。接種方式對胚性愈傷組織誘導(dǎo)影響大,本試驗(yàn)選取7月14日到8月11日5個(gè)采集時(shí)期的球果幼胚為外植體,研究結(jié)果顯示:在這5個(gè)時(shí)期中,以帶雌配子體方式比直接胚接入的方式,胚性愈傷組織誘導(dǎo)率更高。胚性愈傷組織呈現(xiàn)白色、半透明粘液狀,少部分質(zhì)地疏松、顆�；癄�,為胚性愈傷組織,在顯微鏡下可觀察到,愈傷組織表面有許多伸出的絲狀物,在顯微鏡下可觀察到胚性細(xì)胞由小而密集的胚頭細(xì)胞和長的空泡化的胚柄細(xì)胞組成,整體細(xì)胞較小,排列緊密,經(jīng)碘-碘化鉀染色后,可觀察到胚性細(xì)胞質(zhì)濃密,細(xì)胞核大且易被染色,其中胚頭細(xì)胞呈現(xiàn)黃色,具有高活性分生組織中,細(xì)胞有絲分裂活躍,愈傷組織增殖較快,胚柄細(xì)胞呈現(xiàn)大的液泡化狀態(tài)、染色后,孤立的細(xì)胞核獨(dú)立于細(xì)胞中。非胚性愈傷組織為淺白色、乳黃色或黃褐色顆粒狀,表面疏松,不規(guī)則狀,在顯微鏡下可觀察到,愈傷組織整體由很多大小差不多的圓球狀細(xì)胞組成,細(xì)胞間差異較大,細(xì)胞較大,排列疏松,無規(guī)則,經(jīng)碘-碘化鉀染色后,可觀察到細(xì)胞核小,具有大液泡,細(xì)胞質(zhì)少,不易被染色。在生理生化上,其中內(nèi)源激素的含量上也有差異,本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),除ABA含量,胚性愈傷組織中的含量高于非胚性愈傷組織外,其他三種激素IAA、ZR、GA3的含量,均為非胚性愈傷組織高于胚性愈傷組織。推斷高濃度的ABA和低濃度的IAA、ZR、GA3可以利于胚性愈傷組織的形成。利用碘-碘化鉀染色對濕地松胚性愈傷組織中早期原胚組織進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)濕地松胚性愈傷組織起源于合子胚胚軸,胚性細(xì)胞由兩類細(xì)胞組成,一種是細(xì)胞質(zhì)濃厚的胚頭細(xì)胞,一類是具有大液泡透明的較長胚柄細(xì)胞。胚性細(xì)胞包含原胚團(tuán)Ⅰ、原胚團(tuán)Ⅱ和原胚團(tuán)Ⅲ以及一些游離的細(xì)胞團(tuán)。
【學(xué)位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S791.246
【圖文】：

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本文編號：2786863