【摘要】：SPL是植物特異性的轉錄因子家族,通過調節(jié)各種生理生化過程在植物生長和發(fā)育中起到重要作用。本實驗通過構建白樺BpSPL9基因的植物抑制表達載體和miR156的過表達載體,進行白樺的遺傳轉化,對獲得的轉基因株系進行表型觀測,并驗證白樺miR156和BpSPL9基因的功能及調控關系。主要研究包括:1.應用Gateway的方法構建白樺BpSPL9的植物抑制表達載體,采用根瘤農(nóng)桿菌介導的合子胚法進行白樺的遺傳轉化,通過PCR和定量PCR的方法檢測轉基因植株,結果表明,白樺BpSPL9基因已經(jīng)成功整合到了植物的基因組上。通過對BpSPL9抑制表達轉基因白樺株系進行表型觀測,發(fā)現(xiàn)轉基因株系苗高比對照植株的苗高低30.34%,地徑低6.24%,單株葉片數(shù)量少于26.03%,第七八片葉葉面積分別低于42.87%和50.91%,葉片長寬比低于27.21%和27.99%,葉間距主要分布在8-14 mm之間,而非轉基因對照植株的節(jié)間距分布在10-14 mm之間。對轉基因植株進行激素含量測定,結果表明:GA3、IAA及6-BA含量較非轉基因植株含量降低。2.應用Gateway技術構建白樺miR156的植物過表達載體,采用根瘤農(nóng)桿菌介導的合子胚法進行白樺的遺傳轉化,通過PCR和定量PCR的方法鑒定轉基因植株,結果表明,白樺miR156已經(jīng)成功整合到了植物的基因組上。并且轉基因植株的miR556表達量高于非轉基因對照植株。通過對轉miR156白樺株系進行表型觀察,發(fā)現(xiàn)其苗高比對照植株的苗高39.88%,地徑高18.41%,單株葉片數(shù)量多于46.74%,第七、八片葉葉面積分別低于58.92%和75.60%,葉片長寬比高于4.47%和4.53%,葉間距主要位于6-8 mm,而對照植株的節(jié)間距主要位于10-14 mm,節(jié)間距比對照植株短。對轉基因植株進行激素含量測定,結果表明:GA3、IAA、BR及6-BA含量較非轉基因植株含量增加,葉綠素含量及花青素含量也都有明顯增加。白樺12條SPL基因家族中7條有microRNA156識別位點,通過對miR156過表達轉基因株系的定量分析,選取表達量較高的2個號的cDNA為模板,對7條SPL基因進行定量分析,定量PCR結果表明:BpSPL5、BpSPL8、BpSPL9、BpSPL11、BpSPL12基因表達量有所下降,表明這5條基因受miR156的調控,miR156和BpSPL9基因呈現(xiàn)負調控的關系。 【學位授予單位】：東北林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S792.153

【圖文】：

以多年生的白樺的葉片ｃＤＮＡ為模板，根據(jù)白樺轉錄組數(shù)據(jù)獲得的辦５／１９全長，逡逑設計特異引物，進行ＰＣＲ擴增，擴增產(chǎn)物于０．８％瓊脂糖凝膠中進行電泳檢測，結果顯逡逑示在１１７６ｂｐ處獲得特異條帶，，與目標大小一致（見圖２－１）。逡逑Ｔｕｎｖ邋Ｉ逡逑５＊０１＾邋＿壚（、：５．、：：：＿＿：丨．４：呡賽—Ｊｊ逡逑２３＜？ｒ邐；逡逑圖２－１基因ＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖譜逡逑Ｍ．邋ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；邋１．水對照；２．邋尸基因逡逑－１０－逡逑

ＴＯＰＯ反應液轉入大腸桿菌中，涂在篩選（卡那霉素）平板中，３７邋°Ｃ過夜，隨機挑逡逑取單克隆進行菌液ＰＣＲ檢測。結果顯示，挑取的６個單克隆中３個檢測為陽性，目的逡逑基因辦兌Ｚ９抑制表達基因已經(jīng)整合到了邋ＴＯＰＯ載體上，如圖２－２。逡逑■＾＾＾；縫＿：栜‘戮後象囊灥１＿：黎？

本文編號：2712261