棉蚜(Aphis gossypii Glover),是重要的農(nóng)林害蟲,可以響應(yīng)光周期的變化進行孤雌生殖和有性生殖,此為生殖型多型現(xiàn)象;同時其還具有翅多型現(xiàn)象。棉蚜生殖型轉(zhuǎn)變受到人們的普遍關(guān)注而背后分子機制一直不得而知。RNAi技術(shù)自發(fā)現(xiàn)以來就成為研究基因功能的重要工具,廣泛應(yīng)用于蜜蜂(Apoidea)、蟋蟀(Gryllidae)、果蠅(Drosophila melanogaster)、豌豆蚜(Acyrthosiphum pisim)等多種模式生物的研究中,但不同物種間RNAi干擾效率差異較大。前期,我們采用飼喂和注射法對棉蚜RNAi進行了較為系統(tǒng)的研究,同時我們也獲得了性母誘導(dǎo)產(chǎn)生的必備條件,這些為開展棉蚜性母形成分子機制的研究奠定了基礎(chǔ)。胰島素信號通路參與調(diào)控多種昆蟲的多型現(xiàn)象,如褐飛虱(Nilaparvata lugens)的長翅短翅、蜜蜂的工蜂蜂王分化。作為調(diào)控生物生長發(fā)育、代謝、生殖以及衰老等生理過程的重要激素,其在棉蚜生殖型轉(zhuǎn)變中的作用機制仍不明了。本實驗以棉蚜為研究對象,選用胰島素信號通路中的關(guān)鍵基因進行RNA干擾,通過檢測干擾效率、觀察表型以闡述胰島素信號通路各基因?qū)γ扪?..

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
一 引言
    1.1 棉蚜
        1.1.1 棉蚜生活史簡介
        1.1.2 生殖可塑性
        1.1.3 翅型的分化
    1.2 胰島素
        1.2.1 胰島素簡介
        1.2.2 胰島素信號通路
        1.2.3 昆蟲中胰島素信號通路的研究
    1.3 RNAi
        1.3.1 RNAi的機理
        1.3.2 RNAi在生物學(xué)方面的功能
        1.3.3 RNAi在昆蟲方面的研究
    1.4 研究意義
二 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 PCR克隆并測序驗證基因擴增片段?
        2.2.2 LB溶液和LB平板的配制
        2.2.3 連接及轉(zhuǎn)化：（pGM-T克隆試劑盒）
        2.2.4 dsRNA合成
        2.2.5 cDNA的制備及qRT-PCR
        2.2.6 棉蚜蟲體、卵巢觀察
        2.2.7 注射的方法
        2.2.8 殼聚糖包埋dsRNA方法
        2.2.9 實驗流程
三 實驗結(jié)果
    3.1 棉蚜中注射胰島素受體在G2中檢測干擾效率
    3.2 干擾InR1，PI3K，Akt和Foxo對棉蚜G1發(fā)育的影響
四 討論
    4.1 干擾胰島素信號通路中基因?qū)γ扪罣2的影響
    4.2 干擾胰島素信號通路中基因?qū)γ扪罣1的影響
五 結(jié)論
符號說明
參考文獻
致謝



本文編號：3899827