柑橘潰瘍病(Citrus canker)為世界檢疫性病害,是柑橘重要的病害之一,在我國主要由柑橘黃單胞柑橘亞種(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)引起。為了明確湛江地區(qū)柑橘潰瘍病的病原類型并篩選出有效的防治藥劑,本研究以染病檸檬葉片為材料進行病原菌的分離鑒定,利用Nanopore三代測序技術(shù)平臺進行病原菌全基因組測序,采用平板稀釋分離、形態(tài)學觀察和16S序列分析對病葉內(nèi)生菌分離鑒定后進行平板對峙試驗,檢測內(nèi)生細菌與柑橘黃單胞的相互作用,并通過抑菌圈法檢測了幾種常用藥劑對柑橘潰瘍病菌的抑制效果。1.從疑似柑橘潰瘍病的檸檬病葉上分離到病原菌菌株zlm1908,通過形態(tài)學觀察、生理生化指標測定及分子生物學鑒定,確定該病原菌為柑橘黃單胞柑橘亞種(Xcc),離體接種在檸檬和紅江橙葉片上,均產(chǎn)生典型的潰瘍癥狀。2.全基因組測序結(jié)果表明菌株zlm1908的基因組大小為5.19 Mb,含有1條5,192,880 bp的染色體和2條長度分別為34,099 bp和119,114 bp的環(huán)狀質(zhì)粒,GC含量為64.67%。比較基因組研究發(fā)現(xiàn)菌株zlm1908與源自江西的jx-...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 柑橘潰瘍病及其病原菌研究進展
        1.1.1 柑橘潰瘍病的癥狀特點
        1.1.2 柑橘潰瘍病病原的特征
        1.1.3 柑橘潰瘍病病原的分類和命名
    1.2 柑橘潰瘍病的防治研究進展
        1.2.1 檢疫防控
        1.2.2 農(nóng)業(yè)防治
        1.2.3 化學防治
    1.3 內(nèi)生菌及其應(yīng)用研究進展
        1.3.1 內(nèi)生菌的概述
        1.3.2 內(nèi)生菌的拮抗作用機理
        1.3.3 芽孢桿菌在柑橘潰瘍病生物防治中的應(yīng)用
    1.4 基因組學的研究進展
        1.4.1 全基因組測序技術(shù)的發(fā)展
        1.4.2 細菌全基因組測序的應(yīng)用
        1.4.3 柑橘潰瘍病菌基因組學研究
    1.5 技術(shù)路線
    1.6 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 供試培養(yǎng)基
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑
    2.2 方法
        2.2.1 病原菌的分離純化
        2.2.2 病原菌的形態(tài)學觀察
        2.2.3 病原菌的分子生物學鑒定
        2.2.4 病原菌的致病性測定
        2.2.5 病原菌的生理生化測定
        2.2.6 病原菌的全基因組測序
        2.2.7 比較基因組學
        2.2.8 內(nèi)生細菌的分離與鑒定
        2.2.9 拮抗菌株篩選及抑菌試驗
        2.2.10 殺菌劑對柑橘潰瘍病菌的室內(nèi)毒力測定
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 病原菌的分離純化
    3.2 病原菌的形態(tài)學觀察
        3.2.1 鞭毛及莢膜觀察
        3.2.2 革蘭氏染色觀察
    3.3 病原菌的分子生物學鑒定
    3.4 病原菌的致病性測定
    3.5 病原菌的生理生化測定
    3.6 病原菌的全基因組測序
        3.6.1 數(shù)據(jù)過濾統(tǒng)計
        3.6.2 基因組組裝
        3.6.3 基因組組分分析與預測
        3.6.4 基因組功能注釋
        3.6.5 蛋白亞細胞定位分析
        3.6.6 基因組圈圖分析
    3.7 柑橘潰瘍病菌的比較基因組學分析
    3.8 內(nèi)生菌的分離與鑒定
        3.8.1 內(nèi)生菌的分離純化及菌落形態(tài)觀察
        3.8.2 內(nèi)生菌的分子鑒定
    3.9 拮抗菌株篩選及抑菌試驗
        3.9.1 平板抑菌試驗
        3.9.2 拮抗菌株菌落形態(tài)觀察
    3.10 殺菌劑對柑橘潰瘍病菌的室內(nèi)毒力測定
        3.10.1 供試藥劑對柑橘潰瘍病菌的室內(nèi)毒力測定
        3.10.2 供試藥劑對柑橘潰瘍病菌的毒力回歸方程
4 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
    4.3 有待進一步研究的問題
參考文獻
附錄1
附錄2
致謝
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導師簡介



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