發(fā)布時間：2023-08-29 22:43

　　山核桃干腐病(Botryosphaeria dothidea)是浙江重要經(jīng)濟(jì)樹種山核桃樹的最主要病害,導(dǎo)致超過90%的山核桃樹發(fā)病,對當(dāng)?shù)卦斐闪司薮蟮慕?jīng)濟(jì)損失。目前針對該病的防治還以戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑等化學(xué)農(nóng)藥為主,盡管這些化學(xué)農(nóng)藥可以有效控制山核桃干腐病,但同時也存在增加真菌耐藥性和環(huán)境污染等諸多問題,因此開發(fā)一個新的防治山核桃干腐病的植物源農(nóng)藥迫在眉睫�？鄥A是一種從苦參中提取的喹諾里西啶類生物堿,在防治植物真菌病害方面具有廣闊的應(yīng)用前景,然而由于苦參堿對植物病原真菌的抗真菌活性及其抗真菌機(jī)制尚不明確,阻礙了苦參堿制劑的開發(fā)和實際應(yīng)用。鑒于此,本研究測定了苦參堿對山核桃干腐病病原菌的抗真菌活性,并進(jìn)一步通過探討苦參堿對真菌細(xì)胞膜、呼吸代謝和轉(zhuǎn)錄組的影響,闡述其作用機(jī)制,最后通過研究苦參堿對抗真菌農(nóng)藥的增效作用,篩選出具有田間應(yīng)用潛力的組方,為苦參堿在林業(yè)上的應(yīng)用和推廣打下堅實理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.采用菌絲體生長速率法測定了苦參堿對7種林業(yè)病原真菌的抑真菌活性,并以最敏感的山核桃干腐病病原菌為研究對象,進(jìn)一步研究苦參堿對其孢子萌發(fā)和菌絲生長的抑制作用。結(jié)果顯示:苦參堿對山核...

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 植物源農(nóng)藥研究進(jìn)展
        1.1.1 植物源殺蟲劑
        1.1.2 植物源抗真菌劑
        1.1.3 植物源除草劑、生長調(diào)節(jié)劑
    1.2 生物堿研究進(jìn)展
        1.2.1 生物堿抗腫瘤活性
        1.2.2 生物堿抗炎活性
        1.2.3 生物堿抗真菌活性
        1.2.4 生物堿抗病毒活性
    1.3 苦參堿的研究進(jìn)展
        1.3.1 苦參堿抗真菌活性
        1.3.2 苦參堿殺蟲活性
        1.3.3 苦參堿調(diào)節(jié)植物生長活性
        1.3.4 苦參堿抗癌活性
        1.3.5 苦參堿作用機(jī)制
    1.4 山核桃干腐病研究進(jìn)展
    1.5 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在藥物研究中的應(yīng)用
        1.5.1 新一代測序技術(shù)
        1.5.2 轉(zhuǎn)錄組技術(shù)在抗真菌活性研究中的應(yīng)用
    1.6 本研究的目的和意義
2 苦參堿對山核桃干腐病病原菌的離體抑菌活性測定
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗藥物及儀器
        2.1.2 試驗菌種
    2.2 試驗方法
        2.2.1 馬鈴薯固體培養(yǎng)基的配置
        2.2.2 帶藥培養(yǎng)基的配置
        2.2.3 真菌的活化
        2.2.4 苦參堿對林業(yè)病原真菌的抑真菌活性的測定
        2.2.5 苦參堿對山核桃干腐病病原菌孢子萌發(fā)的影響
        2.2.6 苦參堿對山核桃干腐病病原菌生物量的影響
        2.2.7 苦參堿的抑真菌作用時間
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理與分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 苦參堿對7種植物病原真菌的抑菌效果觀察
        2.3.2 苦參堿對6種病原真菌的抑真菌活性
        2.3.3 苦參堿對山核桃干腐病病原菌孢子萌發(fā)的影響
        2.3.4 苦參堿對山核桃干腐病病原菌生長量的影響
        2.3.5 苦參堿的抑真菌作用時間
    2.4 本章小結(jié)
3 苦參堿對山核桃干腐病病原菌細(xì)胞膜的影響
    3.1 試驗材料
        3.1.1 試驗藥物及儀器
        3.1.2 主要試劑配置
        3.1.3 試驗試劑盒
    3.2 試驗方法
        3.2.1 帶藥培養(yǎng)基的配置
        3.2.2 山核桃干腐病病原菌樣品的準(zhǔn)備
        3.2.3 倒置顯微鏡觀察
        3.2.4 掃描電鏡觀察
        3.2.5 透射電鏡觀察
        3.2.6 苦參堿對山核桃干腐病病原菌細(xì)胞膜通透性的影響
        3.2.7 總脂質(zhì)含量測定
        3.2.8 丙二醛含量測定
        3.2.9 活性氧含量測定
        3.2.10 蛋白質(zhì)含量測定
        3.2.11 保護(hù)酶活性測定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 倒置顯微鏡觀察苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲形態(tài)的影響
        3.3.2 掃描電鏡觀察苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲形態(tài)的影響
        3.3.3 透射電鏡觀察苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲超微結(jié)構(gòu)的影響
        3.3.4 苦參堿對山核桃干腐病病原菌細(xì)胞膜通透性的影響
        3.3.5 苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)總脂質(zhì)含量的影響
        3.3.6 苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)丙二醛含量的影響
        3.3.7 苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)活性氧含量的影響
        3.3.8 苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)蛋白質(zhì)含量的影響
        3.3.9 苦參堿對山核桃干腐病病原菌保護(hù)酶的影響
    3.4 本章小結(jié)
4 苦參堿對山核桃干腐病病原菌呼吸代謝的影響
    4.1 試驗材料
        4.1.1 試驗儀器
        4.1.2 試驗試劑盒
        4.1.3 試驗菌種
    4.2 試驗方法
        4.2.1 帶藥培養(yǎng)基的配置
        4.2.2 山核桃干腐病病原菌樣品的準(zhǔn)備
        4.2.3 ATP含量測定
        4.2.4 苦參堿對山核桃干腐病病原菌呼吸代謝的影響
        4.2.5 三羧酸循環(huán)相關(guān)酶活性的測定
        4.2.6 糖酵解過程相關(guān)酶活性的測定
        4.2.7 ATP酶活性測定
        4.2.8 苦參堿對山核桃干腐病病原菌線粒體呼吸作用的影響
        4.2.9 線粒體復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性的測定
        4.2.10 魚藤酮對苦參堿處理后山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)活性氧含量的影響
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)ATP含量的影響
        4.3.2 苦參堿對呼吸代謝的影響
        4.3.3 苦參堿對山核桃干腐病病原菌三羧酸循環(huán)的影響
        4.3.4 苦參堿對山核桃干腐病病原菌糖酵解過程的影響
        4.3.5 苦參堿對山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)ATP酶活性的影響
        4.3.6 苦參堿對山核桃干腐病病原菌線粒體呼吸作用的影響
        4.3.7 苦參堿對山核桃干腐病病原菌線粒體復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性的影響
        4.3.8 魚藤酮對苦參堿處理后山核桃干腐病病原菌菌絲體內(nèi)活性氧含量的影響
    4.4 本章小結(jié)
5 苦參堿抑制山核桃干腐病病原菌的轉(zhuǎn)錄組分析
    5.1 試驗材料
        5.1.1 試驗儀器
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 試驗菌種
    5.2 試驗方法
        5.2.1 轉(zhuǎn)錄組樣品的制備
        5.2.2 山核桃干腐病病原菌總RNA的提取及其質(zhì)量鑒定
        5.2.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的測序及其質(zhì)量控制
        5.2.4 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的組裝及評估
        5.2.5 基因功能注釋
        5.2.6 基因表達(dá)量分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 山核桃干腐病病原菌RNA的質(zhì)量檢測
        5.3.2 測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制
        5.3.3 測序結(jié)果組裝
        5.3.4 Unigene功能注釋
        5.3.5 差異表達(dá)分析
        5.3.6 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的深入比較分析
    5.4 本章小結(jié)
6 苦參堿對殺菌劑抗山核桃干腐病病原菌的增效作用
    6.1 試驗材料
        6.1.1 試驗儀器
        6.1.2 試驗試劑
        6.1.3 試驗菌種
    6.2 試驗方法
        6.2.1 化學(xué)農(nóng)藥單劑對山核桃干腐病病原菌抑菌效果測定
        6.2.2 八種化學(xué)農(nóng)藥對山核桃干腐病病原菌的毒力回歸方程和IC₅₀值
        6.2.3 苦參堿與8種化學(xué)農(nóng)藥間的增效作用試驗
        6.2.4 苦參堿與甲基托布津的聯(lián)合毒力測定
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 八種化學(xué)農(nóng)藥對山核桃干腐病病原菌的毒力回歸方程和IC₅₀值
        6.3.2 最佳復(fù)配組合的篩選
        6.3.3 苦參堿與甲基托布津最佳復(fù)配比例的篩選
    6.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
附件



本文編號：3844430