齒蘭環(huán)斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)屬于煙草花葉病毒屬(Tobamovirus),是導致蘭花失去經(jīng)濟價值和觀賞價值的主要病毒之一。近年來,由于國際市場對ORSV有較高的檢疫要求,蘭花種苗生產(chǎn)企業(yè)及進出口檢疫部門對該病毒檢測產(chǎn)品有較大需求。但是,由于ORSV與同屬病毒存在明顯血清學交叉反應,導致使用多克隆抗體的檢測產(chǎn)品準確性較差,無法滿足市場需求。本文為提高檢測產(chǎn)品的準確性,首先使用ORSV多克隆抗體(ORSV-PAbs)對噬菌體展示7肽庫進行淘洗富集;采用高通量測序技術測定噬菌體展示多肽的基因序列,得到4681條序列,其中有58條推導的氨基酸序列與ORSV高度同源,主要分布在1³5_aa、43⁶8_aa、107¹53_aa;同時結合位點保守性,初步表明ORSV的特異抗原表位位于:₂SYTITDPSKLAYLSSAWADPNSLINLCTN₃₀、₅₀AD...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮寫詞對照表
第1章 引言
    1.1 齒蘭環(huán)斑病毒的危害
    1.2 齒蘭環(huán)斑病毒的防治措施
    1.3 齒蘭環(huán)斑病毒的病毒檢測技術
    1.4 血清學檢測產(chǎn)品的存在問題
    1.5 抗原表位應用研究概況
    1.6 選題依據(jù)和目的意義
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要儀器與設備
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 病毒毒源和抗體
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 噬菌體展示多肽庫技術篩選ORSV抗原表位
        2.2.2 Trx-10 肽融合蛋白原核表達載體的構建
        2.2.3 Trx-S-30 肽融合蛋白原核表達載體的構建
        2.2.4 表達載體的測序與誘導表達
        2.2.5 多肽融合蛋白和抗體特異性反應實驗
        2.2.6 抗原表位多肽的化學合成
        2.2.7 抗原表位多肽配基親和介質(zhì)的制備與抗體純化
第3章 結果與分析
    3.1 噬菌體展示多肽庫技術篩選ORSV抗原表位實驗結果
    3.2 抗原表位驗證實驗結果
        3.2.1 Trx-10 肽、Trx-15 肽原核表達載體的構建結果
        3.2.2 Trx-S-30 肽融合蛋白原核表達載體的構建結果
        3.2.3 多肽融合蛋白的誘導表達實驗結果
        3.2.4 多肽融合蛋白與抗體特異性反應
    3.3 抗原表位多肽配基親和介質(zhì)的制備與抗體純化實驗結果
        3.3.1 抗原表位多肽的合成結果
        3.3.2 抗原表位多肽配基親和介質(zhì)的制備實驗結果
        3.3.3 抗原表位抗體的純化實驗結果
        3.3.4 抗原表位抗體的特異性實驗結果
第4章 結論與展望
    4.1 結論
    4.2 展望
參考文獻
致謝



本文編號：3836926