瓜實蠅Bactrocera cucurbitae(Copuillett)隸屬雙翅目 Diptera,實蠅科 Tephritidae,果實蠅屬Bactrocera Macquar,其繁殖力強,寄生范圍廣,主要為害葫蘆科和茄科植物,已成為世界農業(yè)生產上的重要害蟲之一。性別決定是影響瓜實蠅生殖、發(fā)育的關鍵因素。transformer(tra)是很多昆蟲性別決定中的一個關鍵基因,特別是在雙翅目昆蟲中。但迄今為止瓜實蠅性別決定的分子機制尚未不清楚,而且瓜實蠅的transformer尚未得到鑒定。本次研究以瓜實蠅為試驗材料,利用RT-PCR結合RACE技術,分離瓜實蠅tra(Bcutra)基因,采用半定量RT-PCR方法研究tra基因在瓜實蠅不同發(fā)育時期的表達情況,研究該基因在瓜實蠅性別決定中的可能作用,利用CRISPR/Cas9技術敲除瓜實蠅tra基因,為防治瓜實蠅提供新思路、新方法。在這項研究中,我們從瓜實蠅tra基因中分離和鑒定得到一個雌性特異轉錄本和二個雄性特異轉錄本,Bcutra基因的結構已經被確定,并且已經發(fā)現在Bcutra中存在多個保守的TRA/TRA-2結合位點。BcuTRA與其他...

【文章頁數】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
搪要
Abstract
1 引言
    1.1 瓜實蠅簡介
    1.2 昆蟲性別決定
    1.3 CRISPR/Cas9技術
    1.4 技術線路
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 供試昆蟲
        2.1.2 主要儀器設備
        2.1.3 主要試劑盒和試劑
        2.1.4 部分溶液配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 瓜實蠅的飼養(yǎng)
        2.2.2 Bcutra基因鑒定
        2.2.3 Bcutra基因結構分析
        2.2.4 序列分析與進化樹構建
        2.2.5 Bcutra不同時間性別發(fā)育表達分析
        2.2.6 利用CRISPR/Cas9技術敲除Bcutra基因
3 結果與分析
    3.1 瓜實蠅總RNA提取
    3.2 Bcutra基因中間片段的獲得
    3.3 用RACE技術擴增Bcutra基因全長
    3.4 Bcutra基因結構分析
        3.4.1 Bcutra基因組DNA提取與PCR擴增
        3.4.2 Bcutra基因結構和剪接類型
    3.5 瓜實蠅tra基因生物信息學分析
        3.5.1 Bcutra核苷酸序列與氨基酸序列
        3.5.2 Bcutra氨基酸序列比對
        3.5.3 TRA系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.5.4 BcuTRA氨基酸序列理化性質分析與高級結構預測
    3.6 Bcutra不同發(fā)育時間表達分析
        3.6.1 RNA提取
        3.6.2 半定量PT-PCR分析Bcutra不同時期的表達
    3.7 利用CRISPR/Cas9技術敲除Bcutra基因
        3.7.1 Cas9載體線性化
        3.7.2 Cas9 mRNA合成
        3.7.3 sgRNA體外合成
        3.7.4 構建Bcutra基因的靶向編輯模型
4 討論
5 結論
參考文獻
附錄
致謝
附件
在讀期間與課題有關的研究成果



本文編號：3812734