發(fā)布時間：2023-04-25 00:44

　　在與微生物長期共同進(jìn)化過程中,植物形成了一系列的免疫反應(yīng)抵御病原微生物的侵染�；钚匝鮎OS(Reactive Oxygen Species)迸發(fā)是非常重要的免疫反應(yīng)之一,它不僅可以通過自身的毒害作用抑制病原微生物生長,而且可以作為第二信使介導(dǎo)下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。脂多糖LPS(Lipopolysaccharide),又稱內(nèi)毒素,是革蘭氏陰性菌細(xì)胞外膜的糖脂復(fù)合物,它是一種重要的微生物相關(guān)分子模式MAMP(Microbe-associate Molecular Pattern),可以誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生雙相 ROS 迸發(fā)。LPS及其活性成分lipid A誘導(dǎo)的早期ROS迸發(fā)和典型的MAMPs誘導(dǎo)的ROS迸發(fā)一樣,短暫且快速,而后期緩慢且持久的ROS迸發(fā)是LPS所特有的。LPS引起的雙相ROS迸發(fā)是一個全新的MAMPs引起的免疫反應(yīng),但雙相ROS迸發(fā)的分子機(jī)制及其作用仍然未知。本研究通過遺傳學(xué)篩選得到對LPS引起雙相ROS迸發(fā)不敏感的擬南芥突變體 delt1(Defective inLPS-triggered Late-ROS),通過對 delt1的詳細(xì)研究解析了 LPS調(diào)控雙相ROS進(jìn)發(fā)的分子機(jī)制。獲...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 植物活性氧的產(chǎn)生和清除
        1.1.1 植物活性氧的產(chǎn)生
        1.1.2 植物活性氧的清除
    1.2 NADPH氧化酶的研究進(jìn)展
        1.2.1 NADPH氧化酶種類
        1.2.2 動物NADPH氧化酶的調(diào)控方式
        1.2.3 植物NADPH氧化酶的功能與調(diào)控
    1.3 植物免疫反應(yīng)中活性氧的功能及產(chǎn)生機(jī)制
        1.3.1 植物免疫反應(yīng)中活性氧的功能
        1.3.2 MAMPs誘導(dǎo)植物活性氧的分子機(jī)制
        1.3.3 LPS誘導(dǎo)植物產(chǎn)生活性氧的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的意義及主要內(nèi)容
2 DELT1基因的圖位克隆及MutMap測序
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料與種植方法
        2.1.2 試劑和儀器
        2.1.3 擬南芥雜交
        2.1.4 活性氧(ROS)的檢測
        2.1.5 基因組DNA的提取
        2.1.6 圖位克隆(Map-Based Cloning)
        2.1.7 MutMap測序技術(shù)
    2.2 結(jié)果和分析
        2.2.1 delt1突變體對LPS誘導(dǎo)的ROS迸發(fā)不敏感
        2.2.2 delt1-1和delt1-2突變體是單基因隱性突變
        2.2.3 DELT1基因的圖位克隆
        2.2.4 DELT1基因的MutMap測序
        2.2.5 候選基因的遴選與驗(yàn)證
        2.2.6 雜交互補(bǔ)驗(yàn)證DELT1基因
        2.2.7 delt1-1和delt1-2是功能缺失的突變體
    2.3 本章小結(jié)
3 E919K調(diào)控活性氧的分子機(jī)制
    3.1 材料與方法
        3.1.1 植物材料與種植方法
        3.1.2 試劑和儀器
        3.1.3 菌類材料和質(zhì)粒載體
        3.1.4 植物RNA提取及cDNA的合成
        3.1.5 實(shí)時熒光定量qRT-PCR (Quantitative Real Time PCR)
        3.1.6 擬南芥主根生長的抑制分析
        3.1.7 植物總蛋白的提取
        3.1.8 植物質(zhì)膜蛋白的提取
        3.1.9 Gateway法克隆基因
        3.1.10 免疫印跡Immunblotting蛋白檢測
        3.1.11 蛋白亞細(xì)胞定位
        3.1.12 螢火蟲熒光素酶互補(bǔ)(LCI)實(shí)驗(yàn)
        3.1.13 雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(BiFC)實(shí)驗(yàn)
        3.1.14 NADPH氧化酶活性測定
        3.1.15 氣孔開度實(shí)驗(yàn)
    3.2 結(jié)果和分析
        3.2.1 E919是NADPH氧化酶非常保守的位點(diǎn)
        3.2.2 RBOHD基因CDS序列堿基G2755突變不影響RBOHD的轉(zhuǎn)錄水平
        3.2.3 E919突變不影響RBOHD的亞細(xì)胞定位
        3.2.4 E919突變不影響RBOHD自身互作以及和BIK1的互作
        3.2.5 E919突變不影響RBOHD內(nèi)源蛋白的積累
        3.2.6 E919突變影響RBOHD蛋白的活性
        3.2.7 E919突變不影響lipidA誘導(dǎo)產(chǎn)生的防御相關(guān)基因表達(dá)
        3.2.8 E919突變不影響lipid A誘導(dǎo)的幼苗主根生長抑制
        3.2.9 E919突變影響lipid A誘導(dǎo)的氣孔關(guān)閉
    3.3 本章小結(jié)
4 全文總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
附錄



本文編號：3800360