美洲斑潛蠅是對蔬菜和觀賞性植物造成嚴重危害的一種多食性昆蟲,為了研究美洲斑潛蠅的氣味結合蛋白的功能,本實驗通過對美洲斑潛蠅成蟲轉錄組的測序結果的RACE-PCR擴增驗證,獲得20個具有完整cDNA編碼框的LsatOBPs基因,進一步研究,獲得的主要結論如下:1.獲得20個cDNA全長序列的氣味結合蛋白基因,命名為LsatOBP1-15以及LsatPBPRP2-6,其中9個為Classic OBPs,5個為Minus-C OBPs,4個為Plus-C OBPs,2個為Dimers OBPs。使用熒光定量技術對這20個OBPs基因在美洲斑潛蠅幼蟲、蛹以及成蟲中的相對表達含量分析,結果發(fā)現(xiàn)4個LsatOBPs基因在幼蟲階段表達量很高、2個LsatOBPs在蛹期的表達量很高;5個LsatPBPRPs以及其余9個LsatOBPs在成蟲中的表達量很高,這14個LsatOBPs基因在美洲斑潛蠅不同日齡的雌雄成蟲中表達量也是存在差異性的,8個LsatOBPs基因在新羽化的雌雄成蟲中表達量不存在顯著性差異,14個LsatOBPs在羽化三天后的雄成蟲中的表達量均顯著高于雌成蟲中的表達量,5個LsatOBP...

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 昆蟲化學通訊中的信息物質
        1.1.1 來自植物的化學信息物質---綠葉揮發(fā)性氣味
        1.1.2 來自昆蟲的化學信息物質---信息素類物質
        1.1.3 植物化學信息物質和昆蟲信息素的關系
    1.2 昆蟲的外周嗅覺系統(tǒng)
        1.2.1 昆蟲嗅覺感器種類
        1.2.2 昆蟲外周嗅覺感受過程
    1.3 昆蟲氣味結合蛋白研究
        1.3.1 氣味結合蛋白的分類及結構特征
        1.3.2 氣味結合蛋白生理功能及分布
        1.3.3 氣味結合蛋白結合特性研究及其應用
    1.4 立題依據(jù)及研究內容
        1.4.1 立題依據(jù)
        1.4.2 主要研究內容
第二章 美洲斑潛蠅氣味結合蛋白基因的篩選
    2.1 材料與方法
        2.1.1 美洲斑潛蠅樣品的收集
        2.1.2 主要試劑及儀器設備
        2.1.3 美洲斑潛蠅轉錄組測序及序列拼裝
        2.1.4 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因的鑒定
        2.1.5 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因的生物信息學分析
    2.2 結果與分析
        2.2.1 轉錄組的測序
        2.2.2 轉錄組序列的拼裝
        2.2.3 轉錄組序列注釋與分析
        2.2.4 轉錄組數(shù)據(jù)中美洲斑潛蠅LsatOBPs基因的挖掘
        2.2.5 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因RACE-PCR結果
        2.2.6 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因生物信息學分析
    2.3 討論
第三章 美洲斑潛蠅氣味結合蛋白基因的表達譜分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 美洲斑潛蠅樣品收集
        3.1.2 主要試劑及儀器設備
        3.1.3 總RNA提取
        3.1.4 cDNA反轉錄第一條鏈
        3.1.5 qPCR引物設計
        3.1.6 qPCR反應體系
    3.2 結果與分析
        3.2.1 熒光定量各個樣品總RNA提取
        3.2.2 熒光定量實驗的內參基因的選擇
        3.2.3 熒光定量PCR實驗中模板濃度的確定
        3.2.4 幼蟲和蛹中大量表達的LsatOBPs基因
        3.2.5 雌雄成蟲中大量表達的LsatOBPs基因的表達差異
    3.3 討論
第四章 美洲斑潛蠅氣味結合蛋白的結合特性研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試昆蟲
        4.1.2 主要儀器和試劑
        4.1.3 引物設計
        4.1.4 總RNA的提取和反轉錄
        4.1.5 原核表達載體的構建
        4.1.6 目的蛋白表達和純化
        4.1.7 目的蛋白與 1-NPN的結合常數(shù)測定
        4.1.8 目的蛋白與特定氣味的結合特性分析
    4.2 結果與分析
        4.2.1 原核表達載體構建
        4.2.2 目的蛋白表達形式以及純化結果
        4.2.3 LsatOBP1、LsatOBP13與氣味物質的結合特性分析
        4.2.4 LsatPBPRPs與氣味物質的結合特性分析
    4.3 討論
第五章 美洲斑潛蠅氣味結合蛋白的組織免疫熒光共定位
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實驗材料與儀器
        5.1.3 美洲斑潛蠅氣味結合蛋白的免疫抗體制備
        5.1.4 美洲斑潛蠅頭部掃描電鏡的觀察
        5.1.5 美洲斑潛蠅頭部組織冷凍切片
        5.1.6 LsatOPBs在美洲斑潛蠅頭部的熒光免疫定位
    5.2 結果與分析
        5.2.1 美洲斑潛蠅七個LsatOBPs的蛋白相互作用預測
        5.2.2 美洲斑潛蠅頭部口器以及下顎須掃描電鏡觀察
        5.2.3 美洲斑潛蠅七個LsatOBPs在觸角嗅覺感器上的免疫定位
        5.2.4 美洲斑潛蠅LsatOBPs在口器上的免疫定位
    5.3 結論與討論
第六章 全文結論
    6.1 主要結論
    6.2 本研究的創(chuàng)新
    6.3 本研究的問題與不足
    6.4 本研究的展望
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3776013