植物生命周期的全過程不可能在完全適宜的環(huán)境條件下進(jìn)行,生物脅迫與非生物脅迫貫穿于植物體的整個生命周期。熱激蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)是生物體在不利環(huán)境條件因素刺激下應(yīng)激合成的一組在進(jìn)化上高度保守的蛋白質(zhì),是植物受到外界脅迫時誘導(dǎo)產(chǎn)生的蛋白。HSPs在逆境條件下表達(dá)的增強(qiáng)可以提高植物對脅迫環(huán)境的抵抗能力,在植物與環(huán)境長時間共同進(jìn)化的過程中起到了非常重要的作用。前期轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表明馬鈴薯Favorita中的一個小熱激蛋白基因(PGSC0003DMG400009255)在接種馬鈴薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)24小時后表達(dá)量顯著上調(diào)。為了研究該基因的功能,克隆并構(gòu)建了該基因的植物表達(dá)載體,分別在接種馬鈴薯晚疫病菌,高溫,低溫,干旱脅迫條件下對該基因的表達(dá)量進(jìn)行了熒光定量檢測,主要研究結(jié)果如下:1、基因克隆和序列分析:以馬鈴薯Favorita為材料,根據(jù)Spud DB Potato Genomics Resource(PGSC0003DMG400009255)基因序列設(shè)計引物,并在引物5’端加上BamHI和SalI酶切位點(diǎn),從接種P....

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 馬鈴薯
        1.1.1 中國馬鈴薯生產(chǎn)概況
        1.1.2 馬鈴薯種質(zhì)資源
    1.2 馬鈴薯晚疫病
        1.2.1 馬鈴薯晚疫病的發(fā)生和危害
        1.2.2 馬鈴薯晚疫病的防治措施
    1.3 熱激蛋白
        1.3.1 熱激蛋白的分類及分布特點(diǎn)
        1.3.2 熱激蛋白基因的結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.3 脅迫環(huán)境與植物小熱激蛋白基因的表達(dá)
    1.4 植物遺傳轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展
        1.4.1 植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法
        1.4.2 植物表達(dá)載體與農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化
    1.5 研究目的與意義
第二章 馬鈴薯小熱激蛋白sHSP-F基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 樣品來源及保存
            1.1.2 供試菌種
            1.1.3 主要儀器
            1.1.4 培養(yǎng)基
            1.1.5 試劑及配置
        1.2 方法
            1.2.1 組培苗的培養(yǎng)
            1.2.2 晚疫病菌孢子懸浮液的制備
            1.2.3 實(shí)生苗活體接種
            1.2.4 總RNA的提取
            1.2.5 引物設(shè)計及PCR擴(kuò)增
    2 結(jié)果與分析
        2.1 RNA的提取及質(zhì)量檢測
        2.2 sHSP-F基因的克隆及基因序列分析
    3 小結(jié)與討論
        3.1 小結(jié)
        3.2 討論
            3.2.1 植物總RNA的提取方法
            3.2.2 sHSP-F基因的克隆及序列分析
第三章 sHSP-F植物表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 供試材料
            1.1.2 主要儀器和耗材
            1.1.3 試劑
            1.1.4 培養(yǎng)基及溶液
        1.2 方法
            1.2.1 sHSP-FPCR產(chǎn)物的擴(kuò)增
            1.2.2 目的基因sHSP-FPCR產(chǎn)物的純化
            1.2.3 PCR產(chǎn)物的連接、轉(zhuǎn)化、克隆
            1.2.4 陽性克隆重組子鑒定
            1.2.5 序列測定
            1.2.6 重組pMD18-T質(zhì)粒提取
            1.2.7 重組質(zhì)粒雙酶切
            1.2.8 切膠回收
            1.2.9 植物表達(dá)載體p1301m的提取、雙酶切與純化
            1.2.10 目的基因sHSP-F與p1301m連接
            1.2.11 重組植物表達(dá)載體雙酶切及測序驗(yàn)證
            1.2.12 電擊轉(zhuǎn)化法
            1.2.13 熱激轉(zhuǎn)化法
    2 結(jié)果與分析
    3 小結(jié)與討論
        3.1 小結(jié)
        3.2 討論
            3.2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
            3.2.2 兩種轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌方法的比較及陽性克隆驗(yàn)證
第四章 sHSP-F基因脅迫誘導(dǎo)表達(dá)初步分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 供試材料
            1.1.2 培養(yǎng)基
            1.1.3 主要儀器和試劑
        1.2 方法
            1.2.1 試驗(yàn)材料培養(yǎng)
            1.2.2 引物設(shè)計
            1.2.3 不同脅迫環(huán)境下馬鈴薯易感品種FW的處理方法
            1.2.4 總RNA的提取
            1.2.5 RT-PCR
            1.2.6 實(shí)時熒光定量PCR基因表達(dá)檢測
            1.2.7 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 總RNA濃度和質(zhì)量檢測
        2.2 sHSP-F基因檢測體系的建立
        2.3 qPCRsHSP-F基因表達(dá)檢測結(jié)果
    3 小結(jié)與討論
第五章 全文總結(jié)與展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個人簡介



本文編號：3771381