近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)在昆蟲(chóng)體內(nèi)含有一類(lèi)ds RNA核酸內(nèi)切酶(ds RNase),能夠通過(guò)降解雙鏈RNA(ds RNA)降低昆蟲(chóng)的RNAi效率。本論文利用小菜蛾全基因組數(shù)據(jù)庫(kù),篩選鑒定小菜蛾的ds RNase,通過(guò)體內(nèi)與體外實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)小菜蛾RNAi效率的影響。主要研究結(jié)果如下:依據(jù)部分鱗翅目昆蟲(chóng)ds RNase蛋白序列在小菜蛾基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出4個(gè)目的基因(Pxds RNase1、Pxds RNase2、Pxds RNase3和Pxds RNase4)。且Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3編碼的蛋白含有信號(hào)肽和Endounuclease NS域,而基因Pxds RNase4編碼的蛋白僅含有Endounuclease NS域。通過(guò)進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn),Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3與其他鱗翅目昆蟲(chóng)ds RNase的同源性最高,而Pxds RNase4與雙翅目昆蟲(chóng)ds RNase同源性最高。表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn),這4個(gè)基因都在小菜蛾4齡幼蟲(chóng)期表達(dá)量最高,其中Pxds RNase1和Pxds RNase4在各個(gè)齡期都有表達(dá),而...

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 非特異性核酸內(nèi)切酶
    1.2 ds RNase的研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 供試菌種和質(zhì)粒
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小菜蛾血淋巴和中腸蛋白降解 ds RNA 的測(cè)定
        2.2.2 基因的篩選
        2.2.3 生物信息學(xué)分析
        2.2.4 小菜蛾總 RNA 的提取
        2.2.5 c DNA 的合成
        2.2.6 引物設(shè)計(jì)
        2.2.7 Pxds RNase 序列的克隆
        2.2.8 RT - q PCR 檢測(cè)表達(dá)量
        2.2.9 ds RNA 的合成
        2.2.10 注射和喂飼 dsRNA
        2.2.11 Pxds RNase的原核表達(dá)
        2.2.12 Pxds RNase重組蛋白降解ds RNA能力的測(cè)定
        2.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 中腸和血淋巴總蛋白對(duì)dsRNA的降解
    3.2 小菜蛾ds RNase的序列特征
    3.3 Pxds RNase的時(shí)空表達(dá)模式
    3.4 注射ds Pxds RNase對(duì) RNAi效率的影響
    3.5 喂飼ds Pxds RNase對(duì) RNAi效率的影響
    3.6 PxdsRNase 的體外功能驗(yàn)證
        3.6.1 Pxds RNase的原核表達(dá)
        3.6.2 Pxds RNase降解ds RNA的能力
4 討論
    4.1 昆蟲(chóng)ds RNase的保守性
    4.2 昆蟲(chóng)ds RNase的表達(dá)模式與組織孵育
    4.3 昆蟲(chóng)ds RNase對(duì) RNAi效率的影響
        4.3.1 昆蟲(chóng)ds RNase對(duì)體內(nèi)ds RNA的降解
        4.3.2 昆蟲(chóng)ds RNase對(duì)體外ds RNA的降解
5 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號(hào)：3764735