番茄褪綠病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)是近幾年在我國(guó)新發(fā)生的一種病毒,中國(guó)大陸2013年首次在北京地區(qū)設(shè)施番茄上發(fā)現(xiàn)并報(bào)道該病毒。由于寄主范圍廣泛,傳播介體煙粉虱難防控,ToCV迅速在我國(guó)發(fā)展蔓延,目前全國(guó)范圍內(nèi)13個(gè)省區(qū)已有報(bào)道。感染ToCV的植株長(zhǎng)勢(shì)弱、果實(shí)小、商品性下降,對(duì)我國(guó)番茄產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為明確山西、內(nèi)蒙古、遼寧和吉林四省區(qū)ToCV的發(fā)生情況,以便及早采取防控措施,本研究利用分子生物學(xué)方法,對(duì)采自上述地區(qū)的123份番茄樣品進(jìn)行ToCV分子鑒定,檢出4份陽(yáng)性樣品,首次確定并報(bào)道了ToCV在山西、內(nèi)蒙古、遼寧和吉林四省區(qū)的發(fā)生。CP、Hsp70h序列的核苷酸、氨基酸相似性分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)表明四省區(qū)分離物與中國(guó)其他地區(qū)分離物的核苷酸、氨基酸相似性較高,親緣關(guān)系較近。四省區(qū)的ToCV檢出率均較低,推測(cè)ToCV在上述四省區(qū)處于病害發(fā)展的初始階段,尚未對(duì)番茄產(chǎn)業(yè)造成明顯損失。由于該病害具有流行速度快、傳播范圍廣的特點(diǎn),當(dāng)?shù)馗鞑块T(mén)要引起重視,警惕ToCV的流行爆發(fā)。目前對(duì)ToCV的研究多限于檢測(cè)鑒定、檢測(cè)方法優(yōu)化、進(jìn)化分析等研究,對(duì)于ToCV與寄...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 番茄褪綠病毒研究進(jìn)展
        1.1.1 番茄褪綠病毒的發(fā)生及分布范圍
        1.1.2 番茄褪綠病毒的癥狀與危害
        1.1.3 番茄褪綠病毒的傳播方式及田間寄主范圍
        1.1.4 番茄褪綠病毒的檢測(cè)方法
        1.1.5 番茄褪綠病毒的綜合防治措施
        1.1.6 番茄褪綠病毒的基因組結(jié)構(gòu)及蛋白功能研究進(jìn)展
    1.2 蛋白互作研究方法進(jìn)展
        1.2.1 酵母雙雜交系統(tǒng)
        1.2.2 雙分子熒光互補(bǔ)
    1.3 S期激酶相關(guān)蛋白SKP1 研究進(jìn)展
        1.3.1 SKP1 參與泛素蛋白酶降解過(guò)程
        1.3.2 SKP1 參與激素代謝
        1.3.3 SKP1 參與著絲點(diǎn)功能
    1.4 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 病毒樣品的采集
        2.1.2 試劑與耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需試劑、培養(yǎng)基及配制
    2.2 番茄褪綠病毒的分子鑒定
        2.2.1 植物總RNA提取
        2.2.2 引物合成
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄cDNA合成
        2.2.4 PCR擴(kuò)增
        2.2.5 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.6 PCR產(chǎn)物回收
        2.2.7 核酸純度和濃度測(cè)定
        2.2.8 回收片段連接載體
        2.2.9 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備
        2.2.10 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
        2.2.11 菌落PCR鑒定
        2.2.12 質(zhì)粒DNA的提取
        2.2.13 重組質(zhì)粒鑒定
    2.3 酵母雙雜交篩選與ToCV p22 互作的寄主蛋白
        2.3.1 酵母細(xì)胞感受態(tài)制備(現(xiàn)用現(xiàn)制)
        2.3.2 酵母細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
        2.3.3 誘餌蛋白自激活活性驗(yàn)證
        2.3.4 預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證文庫(kù)效率
        2.3.5 酵母雙雜交篩選
        2.3.6 酵母質(zhì)粒的提取
        2.3.7 質(zhì)粒PCR鑒定
        2.3.8 轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.3.9 菌落PCR鑒定
        2.3.10 菌液測(cè)序
        2.3.11 質(zhì)粒提取并保存
    2.4 ToCV p22與NbSKP1 互作驗(yàn)證
        2.4.1 酵母雙雜交驗(yàn)證ToCV p22與NbSKP1 互作
        2.4.2 BiFC驗(yàn)證ToCV p22與NbSKP1 互作
3 結(jié)果與分析
    3.1 北方四省區(qū)番茄褪綠病毒的分子鑒定
        3.1.1 ToCV CP和 Hsp70h基因的擴(kuò)增
        3.1.2 序列分析
    3.2 酵母雙雜交篩選與ToCV p22 互作的寄主蛋白
        3.2.1 誘餌質(zhì)粒自激活活性驗(yàn)證及文庫(kù)效率測(cè)定
        3.2.2 酵母雙雜交篩選結(jié)果
        3.2.3 測(cè)序結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析及同源性比對(duì)
    3.3 ToCV p22與NbSKP1 蛋白互作驗(yàn)證
        3.3.1 酵母雙雜交驗(yàn)證ToCV p22與NbSKP1 互作
        3.3.2 雙分子熒光互補(bǔ)驗(yàn)證ToCV p22與NbSKP1 互作
4 討論
    4.1 北方四省區(qū)番茄褪綠病毒的分子鑒定
    4.2 酵母雙雜交篩選與ToCV p22 互作的寄主蛋白
    4.3 展望
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3758105