N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯(AHL)作為革蘭氏陰性菌的群體感應(yīng)信號(hào)分子,能夠誘導(dǎo)植物的生理活動(dòng),調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育與抗病性等等。CNGC2作為擬南芥的質(zhì)膜鈣離子通道對(duì)于植物的生長(zhǎng)發(fā)育等方面有著至關(guān)重要的作用。本研究通過(guò)植物生理學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等方面來(lái)探究CNGC2參與植物對(duì)3OC8-HSL的誘導(dǎo)響應(yīng),通過(guò)RNA測(cè)序的方法對(duì)3OC8-HSL誘導(dǎo)植物抗病性過(guò)程中擬南芥轉(zhuǎn)錄組的變化進(jìn)行了分析,為新型生物農(nóng)藥的開發(fā)研究奠定理論基礎(chǔ),提供試驗(yàn)證據(jù)。本試驗(yàn)利用CNGC2的功能缺失突變體dnd1來(lái)探究AHL所誘導(dǎo)的植物生理變化是否與CNGC2有關(guān)。通過(guò)擬南芥的根長(zhǎng)表型,抗病性、鈣離子水平三個(gè)方面進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3OC8-HSL處理擬南芥野生型能夠顯著的促進(jìn)根長(zhǎng)生長(zhǎng)、增強(qiáng)植株抗病性、提高細(xì)胞鈣離子水平;而dnd1型擬南芥則對(duì)3OC8-HSL的處理效應(yīng)顯示出不敏感或處理結(jié)果相反,這都說(shuō)明CNGC2在植物響應(yīng)細(xì)菌AHL過(guò)程中起著重要作用。之后我們利用qRT-PCR分析了AHL對(duì)植物CNGC2基因的表達(dá)影響,結(jié)果顯示CNGC2基因能夠被病原菌的侵染誘導(dǎo)顯著上調(diào)表達(dá),AHL本身雖不影響植物中CNGC2基...

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
1 引言
    1.1 群體感應(yīng)和群體感應(yīng)信號(hào)分子AHLs
        1.1.1 群體感應(yīng)
        1.1.2 群體感應(yīng)信號(hào)分子AHLs
        1.1.3 AHL參與植物生長(zhǎng)發(fā)育與抗逆反應(yīng)
    1.2 鈣離子與CNGC2
        1.2.1 鈣離子在植物體內(nèi)的作用
        1.2.2 鈣離子在植物細(xì)胞中的分布
        1.2.3 植物細(xì)胞中的鈣離子通道
        1.2.4 鈣離子結(jié)合蛋白鈣調(diào)素(CaM)
        1.2.5 植物細(xì)胞內(nèi)的鈣信號(hào)
        1.2.6 環(huán)核苷酸門控陽(yáng)離子通道CNGC2
        1.2.7 CNGC在植物體內(nèi)的作用
        1.2.8 CNGC2與環(huán)核苷酸
    1.3 激光掃描共聚焦顯微鏡
        1.3.1 激光掃描共聚焦顯微鏡研究的意義
        1.3.2 激光掃描共聚焦顯微鏡的功能
        1.3.3 激光掃描共聚焦顯微鏡的優(yōu)缺點(diǎn)
    1.4 實(shí)時(shí)定量熒光PCR的原理及應(yīng)用
        1.4.1 實(shí)時(shí)定量熒光PCR的意義
        1.4.2 實(shí)時(shí)定量熒光PCR的原理
        1.4.3 實(shí)時(shí)定量熒光PCR的應(yīng)用
    1.5 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析的原理及應(yīng)用
    1.6 課題研究的目的及意義
2 質(zhì)膜鈣通道基因CNGC2在植物響應(yīng)細(xì)菌AHL中的功能分析
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 細(xì)菌材料
        2.1.3 主要試劑與溶液配制
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 擬南芥種子清洗
        2.2.2 擬南芥接種移苗
        2.2.3 病原菌活化
        2.2.4 病原菌在擬南芥中定殖菌數(shù)檢測(cè)
        2.2.5 擬南芥葉片抗病性檢測(cè)
        2.2.6 葉綠素含量檢測(cè)
        2.2.7 擬南芥幼苗培養(yǎng)
        2.2.8 Fluo-4AM染色前準(zhǔn)備
        2.2.9 Fluo-4AM染色
        2.2.10 RNA提取前準(zhǔn)備
        2.2.11 RNA提取
        2.2.12 反轉(zhuǎn)錄cDNA
        2.2.13 熒光實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)體系
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 CNGC2對(duì)植物感應(yīng)AHL調(diào)控主根生長(zhǎng)的響應(yīng)
        2.3.2 CNGC2參與3OC8-HSL調(diào)控植物抗病性
        2.3.3 FLUO-4AM檢測(cè)CNGC2在AHL調(diào)控植物細(xì)胞鈣離子水平中的作用
        2.3.4 熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)3OC8-HSL對(duì)擬南芥中CNGC2基因表達(dá)的調(diào)控
    2.4 討論
3 AHL誘導(dǎo)植物抗病的轉(zhuǎn)錄組分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 細(xì)菌材料
        3.1.3 試劑
        3.1.4 儀器
    3.2 方法
        3.2.1 擬南芥與軟腐病菌EC1的培養(yǎng)
        3.2.2 3OC8-HSL和EC1處理擬南芥
        3.2.3 mRNA的提取與純化
        3.2.4 cDNA文庫(kù)的構(gòu)建與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        3.2.5 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 軟腐病菌EC1侵染時(shí)間的選擇
        3.3.2 cDNA文庫(kù)質(zhì)量控制
        3.3.3 3OC8-HSL誘導(dǎo)擬南芥抵御軟腐菌EC1的差異表達(dá)基因分析
        3.3.4 3OC8-HSL所誘導(dǎo)的差異基因功能分析(GO)
        3.3.5 3OC8-HSL所誘導(dǎo)的差異基因功能分析(KEGG)
        3.3.6 3OC8-HSL誘導(dǎo)抗病的差異表達(dá)基因富集分析
    3.4 討論
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3747527